低浓度苯系物接触人群遗传损伤分子标志物研究劳动卫生与环境卫生学专业论文.docx

I I 低浓度苯系物接触人群遗传损伤分子标志物研究 中文摘要 低浓度苯系物接触人群遗传损伤分子标志物研究 中 文 摘 要 目的：以低浓度苯系物职业接触人群为研究对象，采用职业流行病学的方法和分 子生物学技术，确定有效的敏感接触标志物和效应标志物，分析苯接触剂量与遗传损 伤的剂量-反应关系，验证现行苯职业接触限值的安全性，在基因组水平筛选苯基因效 应标志物，探讨苯毒性作用的可能途径,为进一步研究苯毒性分子致癌机制提供线索。 方法：（1）应用职业流行病学方法，对接触低浓度苯系物职业人员进行作业场所 调查、健康危害调查和职业接触评估；（2）建立了高效液相色谱三重串联四级杆质谱 方法，同时测定尿中 8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG、）、反-反式粘糠酸（ttMA）、苯巯基 尿酸（S-PMA），作为接触人群的接触生物标志物；（3）应用染色体畸变率、尿 8-OHdG、 彗星试验（Olive 尾距、尾长、尾 DNA%含量）研究 120 名低浓度苯系物作业 1 年以 上人员染色体、DNA 损伤的效应指标；（4）应用全基因表达谱芯片测定 6 名苯系物 接触人员和 3 名对照组外周血淋巴细胞基因表达水平，筛选异常表达基因，并用实时 定量 PCR（RT-PCR）方法在小范围人群中验证，初步确定苯接触人员的基因生物标 志物，通过 Gene Ontology、Pathway、GenMapp 等数据库分析相关信号通路。 结果：（1）在我国现行苯系物职业接触限值水平以下，苯仍会对作业工人外周 血白细胞造成影响，遗传敏感性较高的作业工人在苯系物接触早期（接触苯 1-2 年内） 外周血白细胞已有改变。（2）在作业场所苯浓度（CTWA）0.25-5.98 mg/m3 范围内，尿 ttMA、S-PMA 与空气中苯浓度均具有良好相关性（r2=0.8759、r2=0.7497），尿 ttMA 略优于尿 S-PMA。由于敏感性高和影响因素少，可作为低浓度职业性苯接触的生物 接触标记物。（3）职业接触低浓度的苯（CTWA6mg/m3）仍然可对接触人员造成遗传 损伤，且损伤程度有随苯浓度的增高而增强的趋势；苯接触浓度与尿 8-OHdG 含量呈 一定的剂量-反应关系（P0.001、r2=0.425）；作为苯致遗传损伤的效应标志物，尿 8-OHdG 的敏感性和特异性略优于彗星发生率；混杂接触限值以内（CTWA50mg/m3） 的甲苯、二甲苯不会对苯遗传损伤产生协同或拮抗作用。（4）发现苯系物职业暴露人 群外周血淋巴细胞出现差异表达的基因 274 个，其中表达上调的基因 178 个，表达下 II II 中文摘要 低浓度苯系物接触人群遗传损伤分子标志物研究 调的基因 96 个，差异表达最显著的基因上调为 12.89 倍，下调为 16.74 倍。GO 通路 分析表明，差异表达的基因涉及核苷酸切除修复、氧化磷酸化、核糖体、内质网蛋白 加工、细胞周期等 21 条通路。在 15 名低浓度苯系物暴露、且外周血白细胞计数相对 偏低的作业工人中，TNFAIP3、CUL4A、LAIR2、PF4、GADD45A 的有效差异性被 RT-PCR 所验证，可作为潜在的苯毒性基因效应标志物。 结论： 1、在我国现行苯系物职业接触限值水平以下，苯仍会引起部分作业工人外周血 白细胞的降低，同时具有一定的遗传损伤效应。 2、本研究建立的高效液相色谱三重串联四级杆质谱法可同时测定尿中8-OHdG、 ttMA和S-PMA，其中尿8-OHdG可作为苯致遗传损伤的效应标志物，尿ttMA和S-PMA 可作为苯暴露的接触标志物。 3、特征性的差异表达基因有可能作为潜在的苯毒性基因效应标志物。 关键词：苯接触，生物标志物，基因差异表达 作 者：刘仁平 指导教师：周建华 教授 本课题受卫生部卫生行业科研专项项目：20090202006 基金资助 III III Study on Biomarkers of Genetic Damage in Occupational Workers with Low-level Benzene Exposure Abstract Study on Biomarkers of Genetic Damage in Occupational Workers with Low-level Benzene Exposure Abstract Objective The aim of this study is to determine sensitive exposure and effect biomarkers and effect markers in occupational workers exposed to low –level of benzene, and to analyze the d