地塞米松、辛伐他汀对小鼠成骨细胞特异性转录因子和细胞增殖作用的影响-外科学专业论文.docx

中文摘要 中文摘要 PAGE PAGE 10 伐他汀浓度分别为 10 5 10-6 10-7mol/L 和对照组 培养基中含地塞 米松 10-8mol/L 和配制辛伐他汀溶液的对照液 原代培养小鼠骨髓基 质细胞于标准培养基中不含地塞米松第 5 天细胞传代 传代细胞 按 2000 个细胞孔接种于 96 孔培养板中 于传代培养当日分别加入 含 Simvastain10 5 10-6 10-7 mol/L 的培养基 各组分别以加地塞米松 为对照组 采用 CellTiter96 试剂盒Promega以 2 日为间隔分别测定 各试验与对照组中每孔细胞数 结果 原代培养加入 10 5 10-6 10-7mol/L 辛伐他汀细胞实验组随 着培养时间延长细胞数量明显少于对照组 其细胞形态和细胞外基质 矿化较对照组更趋成熟 结论 辛伐他汀抑制骨髓基质干细胞体外增生并促进细胞外基质 矿化的作用 而且这种作用随着辛伐他汀抑制增生并促进细胞分化的 作用越明显 辛伐他汀在成骨细胞分化过程中与地塞米松起协同作用 关键词 骨髓基质干细胞 细胞增生 辛伐他汀 第三部分 地塞米松 辛伐他汀对小鼠骨髓来源的成骨细胞型胶原 蛋白表达的影响 目的 通过基因转染的方法分析地塞米松 辛伐他汀对成骨细胞 型胶原蛋白的表达的影响以及确认培养的成骨细胞的分化阶段 方法 取雄性8周ICR小鼠股骨骨髓基质细胞加入10-8mol/L地塞米 松进行原代培养 在细胞培养第五天传代 传代后加入10-6mol/L辛伐 他汀或保持基础培养条件 于不同时间点转染连有绿色荧光蛋白的质 粒 用荧光显微镜观察 拍照 结果 原代培养第三天 培养的小鼠骨髓质基质干细胞胞浆未出现 阳性颗粒 传代后 地塞米松组和辛伐他汀第二天胞浆即有阳性颗粒 表达 随着时间的延长胞浆阳性颗粒增多 结论 1.小鼠骨髓来源的间充质细胞 在传代培养第二天出现成骨 细胞特征 2.地塞米松和辛伐他丁联合应用促进成骨细胞 型胶原蛋白 的表达 关键词 转染 地塞米松 辛伐他汀 成骨细胞 型胶原蛋白 英文摘要 英文摘要 The Mechanisms of Special Transcriptioal Factor and Proliferation of Osteoblast Derived From Mouse Bone Marrow Stem Cell In Vitro By Dexamethasone and Simvastain Abstract Part one The effect of dexamethasone on the expression of cbfa of osteoblast derived from mouse bone marrow stromal cells in vitro Objective To study the effect of dexamethasone on the expression of cbfa and to investigate the mechanism of osteoblast differentiation using a mouse bone marrow culture system. Methods Bone marrow cells were derived from 8-week old ICR mouse. Dexamethasone was initiated in experimental group at the beginning of the cultures. Control group was treated with out of dex.On day 5 after primary cultures,subculture was performed using the same system.The cell nuclear proteins were extracted at different time points.The expression of cbfa was evaluated by Western bloting Results On the day 5 after primary cultures,The protein of cbfa was not detected; On the day 2 after subcultures,The differentiation of groups was not distinctness ; On the day 4 and 6 after subcultures,The protei