供体来源树突状细胞诱导体外扩增Tregs对受体肿瘤免疫的影响-外科学(肝胆外科)专业论文.docx

重庆医 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 Tregs Regulatory T cells 调节性 T 细胞 GM-CSF Granulocyte-macrophage colony -stimulating factor 粒细胞巨噬细胞刺激因子 IL-4 Interleukin-4 白细胞介素-4 IL-2 Interleukin-2 白细胞介素-2 TNF-ɑ Tumor necrosis factor-α 肿瘤坏死因子-ɑ MHC Major histocompatibility complex 主要组织相容复合物 CFSE Carboxyfluorescein diacetate succi -nimidyl ester 羟基荧光素双醋酸盐琥珀 酰亚胺酯 EDTA Ethylene diaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸 FACS Fluorescence activating cell sorter 流式细胞术 MACS Magnetic activated cell sorting 免疫磁珠分选细胞 FBS Fetal calf serum 胎牛血清 FITC Fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 PerCP Peridinin-chlorophyll-protein 叶绿素蛋白 PE P-phycoerythrin 藻红蛋白 APC Allophycocyanin 别藻青蛋白 PBS Phosphate buffer saline 磷酸盐缓冲液 nTreg Naturally Treg 自然调节性 T 细胞 iTreg Induced Treg 诱导型调节性 T 细胞 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 GVHD Graft-versus-host disease 移植物抗宿主病 NK Natural Killer 自然杀伤细胞 SPF Specific pathogen free 无特定病原体 TGF-β Transforming growth factor-β β 转化生长因子 1 IL-10 Interleukin-10 白细胞介素-10 APC CD Antigen presenting cell Cluster of differentiation 抗原递呈细胞 分化群 2 供体来源树突状细胞诱导体外扩增 Tregs 对受体肿瘤 免疫的影响 摘 要 目的 研究过继输注体外扩增 Tregs 治疗是否抑制移植物受体的抗肿瘤 免疫，以及体外扩增 Tregs 与供体来源成熟树突状细胞共培养是否能够 诱导 Tregs 的抗原特异性。 方法 1. 取 C57BL/6（H-2b）小鼠或 BALB/c（H-2d）小鼠骨髓细胞，在 重组鼠源性 GM-CSF 和 IL-4 诱导以及 TNF-α 刺激下分化为成熟树突状 细胞。 2. 免疫磁珠法（MACS）从 BALB/c 或 C57BL/6 小鼠脾脏分选出 CD4+CD25+ Tregs,加入 anti-CD3/CD28 磁珠和高浓度重组鼠源性 IL-2 （1000U/ml），体外扩增 14 天。 3. 在给予低浓度重组鼠源性 IL-2（200U/ml）的条件下，体外扩增 后 CD4+CD25+ Tregs 与成熟树突状细胞（C57BL/6 小鼠 CD4+CD25+ Tregs 与 BALB/c 小鼠成熟树突状细胞或者 BALB/c 小鼠 CD4+CD25+ Tregs 与 C57BL/6 小鼠成熟树突状细胞）混合培养 7 天。 4. 流式细胞术检测成熟树突状细胞及 Tregs 纯度，混合淋巴细胞 反应检测 Tregs 体外抑制功能。 5. 构建小鼠皮肤移植模型检测 Tregs 体内抑制功能。 3 6. 分别注射 B16-F10（小鼠黑色素瘤细胞，H-2b）于 C57BL/6 和 BALB/c 小鼠，建立小鼠肿瘤模型。 7. 收集扩增后及诱导后 Tregs 分别过继输注于 C57BL/6 和 BALB/c 小鼠体内，24 小时后注射 B16-F10。 8. 14 天后处死小鼠，观察肺部肿瘤结节并记数。 结果 1. 扩增后及诱导后 Tregs 与新鲜分选 Tregs 相比，纯度和免疫抑制 功能无明显下降。 2. 扩增后及诱导后 Tregs 能够显著延长同种异体皮肤移植物生存 时间（14.5 天 Vs 9 天，p0.05）。 3. C57BL/6 小鼠单独注射 5×105 B16-F10，14 天后肺部肿瘤结节为 93±12 个，预先输注 1×107 体外扩增后 Tregs，24 小时后注射 5×105 B16-F10，肺部肿瘤结