抵抗素对人脐静脉内皮细胞表达PAI-1、t-PA的机制研究内科学(心血管内科)专业论文.docx

汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 I I PAGE PAGE IV 中文摘要 背景 代谢综合征（metabolic syndrome, MS）是一组主要以腹型肥胖，高血压，胰岛素抵抗 和血脂代谢障碍的病理生理状态，代谢综合征存在血栓前状态被认为与血栓性疾病有着密 切的联系，但其具体机制目前尚不清楚。由脂肪细胞及单核细胞等细胞分泌的脂肪细胞因 子抵抗素（resistin, Re）在代谢综合征的发生、发展中起重要的作用，抵抗素的炎症作用 及其引起的血管内皮细胞功能紊乱可能是引起代谢综合征患者血栓性疾病的重要原因之 一。本课题组前期研究结果表明，在体外培养的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）中，抵抗素对组织型纤溶酶原激活抑制物-1（plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1）、组织型纤溶酶原激活物（tissue plasminogen activator, t-PA）平 衡的打破可能与细胞内的环磷酸腺苷（Adenosine 3’,5’-cyclic monophosphate, cAMP）水平 及细胞丝裂原活化蛋白激酶 p38（p38 mitogen activated protein kinase, p38MAPK）的激活密 切相关，初步揭示了抵抗素的细胞内作用途径，为代谢综合征患者血栓性疾病的发病机制 和防治提供了思路及理论依据。但抵抗素在细胞内的具体作用机制尚不清楚。 目的 本实验旨在进一步观察抵抗素引起 PAI-1、t-PA 失衡与 cAMP 及 p38MAPK 的关系， 进一步探讨代谢综合征患者易患血栓性疾病的原因及机制。 方法 1. HUVECs 4-5 代分为单纯培养基对照组、不同浓度 cAMP（10、30、100、300μM）组， 培养 48h 后，MTT 法检测细胞活性。 2. HUVECs 4-5 代分为 6 组：单纯培养基组（control 组），50ng/ml 抵抗素组，cAMP（30μM） 组，cAMP（30μM）+抵抗素（50ng/ml）组，SB203580（10μM）组，SB203580（10μM） +抵抗素（50ng/ml）组，混合组在抵抗素加入前予 cAMP 和 SB203580 预处理 1h， 培养 48h 后 ELISA 法测各组上清液中 PAI-1 蛋白水平。 HUVECs 4-5 代分为 4 组：control 组，50ng/ml 抵抗素组，cAMP（30μM）组，cAMP （30μM）+抵抗素（50ng/ml）组，混合组在抵抗素加入前予 cAMP 预处理 1h，培养 48h 后 ELISA 法测各组上清液中 t-PA 蛋白水平。 HUVECs 4-5 代分为 5 组：control 组，50ng/ml 抵抗素组，cAMP（30μM）组，cAMP （30μM）+抵抗素（50ng/ml）组，SB203580（10μM）+抵抗素（50ng/ml）组，混合 组在抵抗素加入前予 cAMP 和 SB203580 预处理 1h，培养 48h 后 real-time RT-PCR 法 检测各组 PAI-1 mRNA 的表达。 HUVECs 4-5 代分为 4 组：control 组，50ng/ml 抵抗素组，cAMP（30μM）组，cAMP （30μM）+抵抗素（50ng/ml）组，混合组在抵抗素加入前予 cAMP 预处理 1h，培养 48h 后 real-time RT-PCR 法检测各组 t-PA mRNA 的表达。 HUVECs 4-5 代分为 control 组，抵抗素（50ng/ml）组，cAMP（30μM）组，cAMP （30μM）+抵抗素（50ng/ml）组，培养 30min 后，Western blot 法检测各组 P38MAPK 蛋白磷酸化水平。 结果 1. 10μM 及 30μM cAMP 浓度组对 HUVECs 的细胞活力没有明显影响（P0.05），但 100μM 及 300μM cAMP 浓度组对 HUVECs 的细胞活力产生明显抑制（P0.05）。 2. 与 control 组比抵抗素组单独作用明显升高 PAI-1mRNA 及蛋白水平（P0.05 或 P0.01）；但与单独抵抗素组相比，cAMP 与抵抗素合用及 p38MAPK 抑制剂 SB203580 与抵抗素合用后，PAI-1mRNA 及蛋白水平明显降低（P0.05 或 P0.01）；而抵抗素 及 cAMP 均对 HUVECs 分泌 t-PA 在 mRNA 及蛋白水平上的表达均无影响。 3. 50ng/ml 抵抗素可使 HUVEC