氟对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白和抑制素B的影响-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docx

i喇喇喇1111/1111111111 1ιJ4012 原创性声明 本人郑震声明:所里交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内存外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表戚撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者: 朱tL 日期:).o!o 年 C 月 1号日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学膏关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅:本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部成部分编入有关数据库进行检索，可以来用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者:徐悲J 日期: 2.010年 6 月 f 头日 摘要 摘要 摘要 动物实验资料和人群流行病学调查资料证实氟不仅可以直接作用于事丸和 附挚，破坏其结构，造成生殖损伤，还可以通过干扰下丘脑恻垂体性腺轴和罪丸 周部微环境，引起生殖毒性。 支持细胞(sertoli cell，SC)是靠丸曲细精管中唯一的体细胞，对维持事丸内部 的生精微环境具有极其意耍的作用。首先，支持细胞之间可以形成紧密迎接， 在一定程度上可以阻止外来化学物对生精细胞的影响。其次，支持细胞还能够 分泌各种活性物质，其中研究最多的是雄激素结合蛋白(An drogen Binding Protein ，ABP) 抑制紫阳Inhibin B，INH B)oABP 能够转运和储存罪酬和工氮塑嗣， 调节血液和附罪液中雄激素的浓度。 INHB能够抑制卵泡剌激素 (follicle stimulating hormone ，FSH)分泌，不仅在维持下丘脑·垂体性腺轴的平衡中起着革 要作用，而且可直接促进生精细胞的分化和发宵。由于位置和功能的特殊性， 支持细胞成为许多外源化合物的靶细胞。 目的: 以体外培养的大鼠靠丸支持细胞为载体，使其暴露于不问浓度的氟化纳， 采用RT-PCR 技术和ELlSA方法从基因和蛋白质两个水平分析氟化纳对支持细胞 合成和分泌ABP和INHB的影响，期望为探讨氟化纳引起雄性内分泌紊乱的机制 提供一些线索。 方法z 1 18-21 日龄 SD 大鼠，采用腆蛋白酶和胶原酶两步法分离纯化支持细胞。分 离的支持细胞在 37C 、5%C02 条件下进行培养。确定染毒浓度为 0、2.5μglml 、 5.0μglml.. 10.0 glml 和 20.0μglmlo 2 体外培养支持细胞按上述确定的浓度染毒 24h 后?采用 RT- PCR 技术，以 GAPDH 为内参，检测支持细胞内 ABP 和 INHBmRNA 的相对表达量。 3 采用 ELISA 法测定培养液中 ABP 和 INHB 的含量。 4 统计学分析。运用 SPSS 12.0统计软件的单因素方差分析 (analysis of variance ， ANOVA) 、Bonfferoni 两两比较、Levene 方楚齐性检验对数据进行统计学分析(检 验水准 a = 0.05) 。 摘要 结果: 1 分离培养的支持细胞存活率达到 95% 以上，生长良好，且纯度较高。 2 ①IABP mRNA 相对表达量在各浓度组与对照组相比， 2.5J.lglml 组高于对照， 且差异布统计学意义 (P0.05); 5μglml 组高于对照组， 10J.lglml 和 20μglml 组 低于对照组，但是差异均无统计学意义(扣 0.05) 。②INHBmRNA 相对表达量 在各浓度组与对照组比较， 2.5μglml ，和5J.lglml 组均高于对照组，差异具有统计 学意义 (P0.05); 其余两组低于对照组，但是差异均无统计学意义 (P0.05)。 3 ①各染毒组培养基中的 ABP 含量均低于对照组，但差异没有统计学意义 (P0.05)o @与对照组相比， 2句glml 和 5.0J.lglml 组培养基中 INHB 含量高于 对照组，但差异没有统计学意义 (P0.05); 10μglml 和 20μglml 组培养基中 INH B 含量低于对顿组，但差异无统计学意义(/胁。 .05)。 结论: 本研究的染毒放度范围内，在基因水平，较低浓度的氟 (2.5μglml)可以影响 ABP 和 INHBmRNA 的表达: 在蛋白质水平，氟对 ABP 和 INHB 没有明显影 响。 关键词z 氟大鼠支持细胞雄激素结