干扰素诱导表达的基因在SLE实验诊断中的应用基础研究-生物学；细胞生物学专业论文.docx

摘要 摘要 I I 摘 要 系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus, SLE）是一种累及多系统的 自身免疫性结缔组织病，有着极为广泛的临床表现，其特征是免疫系统的紊乱， 导致抗核抗体（Antinuclear Antibody, ANA）、其他自身抗体的产生和免疫复合物 的沉淀以及补体系统的激活。SLE 的发病机理是非常复杂的，包括环境因素和遗 传因素。近年来研究表明，干扰素（Interferon, IFN）家族及其免疫调控通路可能 在 SLE 发病中具有重要作用[1, 2]，大多数 SLE 患者Ⅰ型 IFN 诱导的基因呈高表达 [3-6]。与Ⅰ型 IFN（主要包括 IFN-α 和 IFN-β 基因）结合的受体复合物由两个亚单 位-IFNAR1 和 IFNAR2 组成，它们的细胞内结构域分别与 Janus 家族的蛋白酪氨 酸激酶（Jak 激酶）相联。Ⅰ型 IFN 与 IFNAR 结合使 Jak 激酶活化，从而使 IFNAR1、 Stat1 和 Stat2 磷酸化。这些 Stats 回到磷酸化的 IFNAR1 形成了两个特殊的转录 激活因子-IFN-α 活化因子（GAF）和 IFN 刺激基因因子 3（ISGF3），它们转移到 细胞核中，分别与被称为 IFN-γ 激活序列（GAS）和 IFN 刺激应答原件（ISRE） 的特殊 DNA 序列结合，从而诱导成千上万的靶基因转录[7-10]。 SLE 的临床表现复杂多样，多器官受累，其诊断和鉴别诊断一直是临床上的 难点，而对于诊断明确了的 SLE 患者，其病情活动状态也难以确定，治疗用药 往往缺乏量化依据。因此临床迫切需要既能反映疾病活动性又具有敏感性和特异 性的指标，为临床诊治提供依据。 本研究采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）方法对 84 例 SLE 患者与 64 名正常对照（NC）人外周血单个核细胞（PBMC）中 5 种 IFN 诱导基因（IFIT1、 IFIT4、OAS1、OASL 及 ISG15）的表达水平（以-ΔΔCt 值表示）进行了检测， 同时检测了其抗 ds-DNA 抗体、ANA、抗 ENA 抗体、C 反应蛋白（CRP）、补体 C3、C4、红细胞沉降率（ESR）等指标，分析这 5 种基因 mRNA 表达水平以及 上述检测指标与疾病活动度之间的相关性，并比较这 5 种基因表达水平及上述指 标在反映 SLE 病情活动度方面的协同性与差异。 实验结果表明，SLE 组与 NC 组相比，IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL 及 ISG15 mRNA 表达显著增高（P0.001）；SLE 活动组与缓解组比较，这 5 种基因的表达 也均增高（P0.01）；且 SLE 组中这 5 种基因的表达水平均与 SLEDAI 积分呈显 著正相关（r0.5, P0.05），表达水平之间也呈正相关（r0.5, P0.05）。 其他实验指标检测结果表明，抗 ds-DNA 抗体与 SLEDAI 积分呈正相关 （r0.5, P0.05），且 SLE 患者组与 NC 组之间、SLE 活动组与缓解组之间阳性 率差异均有统计学意义（P0.01）。同时，补体 C3、C4 与 SLEDAI 积分呈负相 II II 关（r-0.5, P0.05），ESR 与 SLEDAI 积分呈正相关（r0.5, P0.05），且它们在 SLE 患者组与 NC 组之间、SLE 活动组与缓解组之间阳性率差异也具有统计学意 义（P0.05）。ANA 滴度与 SLEDAI 积分无相关性，不能反映疾病活动度，但是 ANA 均质性与斑点型的两种荧光核型在 SLE 活动组与缓解组之间的阳性率差异 均有统计学意义（P0.05）。抗 ENA 抗体虽不能反映疾病活动度，且在 SLE 活 动组与缓解组之间阳性率差异无统计学意义（P0.05），但在 SLE 患者及 NC 组 中的阳性率差异具有统计学意义（P0.05）。CRP 也与 SLEDAI 积分无相关性， 其阳性率在 SLE 活动组与缓解组之间差异无统计学意义（P0.05），但在 SLE 组 与 NC 组之间差异具有统计学意义（P0.05）。 结论: （1） IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL 及 ISG15 的表达水平在 SLE 患者中显著增 高，并且与 SLEDAI 积分呈显著正相关，对 SLE 患者病情活动度和病情 严重度的判断均有较大价值，抑制这 5 种基因的表达可能为 SLE 的治疗 提供新的靶点，同时为 SLE 的鉴别诊断和治疗提供了理论依据。 （2） 抗 ds-DNA 抗体、ESR 与 SLEDAI 积分呈正相关，而补体 C3、C4 与 SLEDAI 积分呈负相关，它们均能够反映 SLE 疾病活动度，可以作为判断 SLE 病 情