副溶血弧菌群体感应与调控的初步分析-生物化工专业论文.docx

副溶血 副溶血弧菌群体感应与调控的初步研究 万方数据 万方数据 副溶血弧菌群体感应与调控的初步研究 摘 要 本论文研究了从罗氏沼虾中分离的副溶血弧菌 VIB461 的群体感应(quorum sensing，QS)系统，并探究了群体感应抑制剂对副溶血弧菌群体感应系统及群 体感应相关性状的调控作用。 本论文的研究内容主要包括以下 3 个部分： 1.副溶血弧菌群体感应信号分子的检测 本文采用报告菌株根癌农杆菌 A136 和紫色杆菌 CV026，结合反相 C18 薄层 层析法 检测 了 副 溶 血 弧 菌 VIB461 产生的 酰 基 高 丝 氨 酸 内 酯 类 信 号 分 子 (acyl-homoserine lactones，AHLs)。结果显示 VIB461 能产生 C6-HSL 和 C8-HSL 两种不同类型的 AHLs 信号分子，并且 AHLs 信号分子的活性随着培养时间延长 呈现出先升高后降低的趋势，在对数生长末期时活性最强。同时我们还使用报告 菌株哈维氏弧菌 JMH597 和 JAF375 检测了 VIB461 产生的 AI-2 型信号分子 (autoinducer-2，AI-2)和霍乱弧菌 I 类信号分子(cholerae autoinducer-l，CAI-1)，结 果显示 VIB461 能产生这两种类型的信号分子，其中 AI-2 信号分子活性在对数 生长期迅速上升至较高的水平并保持至细菌生长的稳定期，而 CAI-1 信号分子仅 在对数生长后期至稳定期前期表现出较强的活性。 2.副溶血弧菌 LuxS/AI-2 型群体感应的研究 本文采用 PCR 扩增了副溶血弧菌 VIB461 的 luxS 基因，通过克隆测序得到 了长度为 388bp 的有效片段，经 BLAST 比对发现其序列与已上传的副溶血弧菌 luxS 基因的相似度高达 98%，与其它菌 luxS 基因的相似度随亲缘关系变远而逐 渐降低。同时我们使用荧光定量 PCR 检测了不同生长阶段和不同培养条件下 VIB461 luxS 基因的表达情况，结果显示 luxS 表达量与 AI-2 活性基本一致，二者 均受生长阶段和培养条件的调控。luxS 基因在对数生长期开始大量表达，并保持 较高的转录水平直至细菌生长稳定期。不同温度、pH 和盐度对 VIB461 的 luxS 基因表达和 AI-2 活性均有影响。当温度、pH 和盐度在一定程度上偏离最适生长 条件时，luxS 表达量和 AI-2 活性均有不同程度升高，但在高温条件下两者均有 所降低。 3.群体感应抑制剂对副溶血弧菌群体感应及相关性状的调控 本文通过报告菌株哈维氏弧菌 JMH597 检测了群体感应抑制剂溴化呋喃酮 抑制群体感应的效果及有效浓度范围，结果显示 2 mg/L 及以上浓度的溴化呋喃 酮均对 JMH597 的荧光有抑制作用，表明该溴化呋喃酮有较强的抑制群体感应的 活性。溴化呋喃酮对副溶血弧菌 VIB461 的最小抑菌浓度为 20 mg/L。我们研究 了亚抑菌浓度的溴化呋喃酮对 VIB461 LuxS/AI-2 型群体感应及 QS 相关的生物膜 和胞外酶的调控作用。结果显示，溴化呋喃酮对 VIB461 luxS 基因表达和 AI-2 活性均有强烈的抑制作用，10 mg/L 溴化呋喃酮对二者的抑制率均达到 80%以上。 溴化呋喃酮能较为有效的抑制 VIB461 生物膜的形成，但对其明胶酶和卵磷脂酶 活性均只有一定的抑制作用，推测这些性状除了受 LuxS/AI-2 型群体感应系统的 调控外，可能还受其它因素的调控。 关键词：副溶血弧菌；群体感应；AHLs；AI-2；CAI-1；luxS；溴化呋喃酮 A prelimilary research on quorum sensing and regulation of Vibrio paraheomolyticus Abstract In this paper, quorum sensing(QS) of Vibrio paraheomolyticus VIB461 isolated from Macrobrachium rosenbergii was investigated. The effects of quorum sensing inhibitor brominated furanone on VIB461 quorum sensing system and related characterizations were also investigated. This study included the following three parts: Detection of quorum sensing signal molecules in Vibri