人eNOS基因启动子的结构改造及其功能初探-暨南大学.PDFVIP

人 eNOS 基因启动子的结构改造及其功能初探 研 究 生 樊振华 导 师 邢飞跃 教授 [ 摘要 ] 目的：探讨定点突变技术改造人内皮细胞一氧化氮合酶（eNOS ）基因 启动子结构后其功能的变化。方法：对带有 eNOS 基因启动子的真核表达载体 pGL2-eNOS-p 进行 PCR 定点突变，在 eNOS 启动子-74 位点插入调控元件 SP1 的识别序列“GGGGCGGGGC ”，并进行相应的电泳鉴定和测序分析；建立氯 化钴（CoCl ）诱导的人脐静脉内皮细胞-12 （HUVEC-12 ）的体外缺氧模型，检 2 测不同浓度 CoCl2 刺激的细胞上清中乳酸脱氢酶（LDH ）的含量；检测不同浓度 和时间 CoCl2 刺激的细胞上清中一氧化氮（NO ）浓度，并使用显微镜通过冷电 荷耦合器件（CCD ）成像记录各组细胞形态变化；把改造前后的载体分别转染 HUVEC-12 细胞，同时对细胞添加 CoCl2 进行不同浓度和时间的刺激，利用双荧