人类白细抗原,小板抗原检测技术.ppt

人类白细胞抗原检测技术，血小板抗原检测技术 输血科 朱伯平 人类白细胞抗原 HLA(human leukocyte antigen） ，(人类白细胞抗原)系统是目前所知人体最复杂的多态系统。自1958年发现(Jean Dausset)第一个HLA抗原，到20世纪70年代，HLA便成为免疫、遗传学、免疫生物学和生物化学等学科的一个重要新兴研究领域。 HLA功能 生物学功能：器官和骨髓移植前供、受者组织相容性配型 其他方面：亲子鉴定以及人类遗传学方面 首个艾滋病治愈病例出现 移植骨髓后获抗体 2011年06月03日 ,对于医生胡特而言，病人蒂莫西·雷·布朗就像漆黑抗艾研究道路上的一道亮光。这名被冠以“柏林病人”的特殊病患同时兼有白血病和艾滋病。在医学界看来，布朗已经是即将踏入坟墓的人，然而在接受骨髓移植后，布朗竟然奇迹般得以重生。这一事件震惊了整个医学界，医生们从他的身上看到了医学界的奇迹：终结艾滋。 人类白细胞抗原(HLA) HLA抗原分布相当广泛，见于所有的有核细胞上，但在淋巴细胞上的密度最高 血小板上的HLA抗原是血小板膜表面的固有结构成分，主要是HLA-I类的A、B位点的抗原 HLA-I类抗原是引起血小板同种免疫和血小板输注无效的主要抗原，约占80% HLA抗原检测技术 人类白细胞抗原检测技术已广泛应用于器官移植前的组织配型 检测方法：血清学方法、细胞学方法和基因分型方法 与临床输血的关系—HLA抗原可引起免疫应答→HLA抗体→发热性非溶血性输血反应和血小板输注无效 HLA血清学方法 血清学方法：是用一系列已知的抗HLA抗原的标准血清来检测未知淋巴细胞表面的HLA抗原型别。 微量淋巴毒实验 原理：淋巴细胞膜表面具有HLA抗原，而分型血清中含有抗特定HLA抗原的细胞毒抗体，该抗体与淋巴细胞膜上的相应的HLA抗原结合后在补体的参与下损伤细胞膜，经染料染色后，通过观察细胞是否被染色来判断待测细胞是否损伤或死亡，进而判断抗原、抗体反应的强度。 微量淋巴细胞毒试验记分 抗血清的来源和标准 ①通过妊娠、输血和同种器官移植等免疫作用产生HLA同种抗体 ②使用纯化的HLA抗原免疫动物，可产生HLA异种抗体 ③使用杂交瘤技术，可获得单克隆抗体 ④少数存在的天然抗体 质量标准 1.血清特异性程度（FP《3%，FN《14%） 2.血清的强度，采用强度指数SI表示，SI》70% HLA细胞学方法 ①纯合细胞分型方法 ②预致敏淋巴细胞试验 ③混合淋巴细胞培养 纯合细胞分型方法 该方法的原理为带有A/A纯合抗原的细胞（HTC）作为刺激细胞，带有未知抗原X/X的检测细胞作为应答细胞，在两种细胞组成的单向混合淋巴细胞培养反应（MLC）中，如果发生刺激反应，表明受检细胞能够识别A抗原当成外来抗原，所以受检细胞不具有A抗原，反之受检细胞可能是A抗原的 杂合子或纯合子 预致敏淋巴细胞试验 在应答细胞A与刺激细胞B的初次混合淋巴细胞培养反应(MLC)中，经过9-12天培养，应答细胞A增生为淋巴细胞后变成小淋巴细胞，即为预致敏淋巴细胞（PL） 混合淋巴细胞培养 两个无关个体的淋巴细胞，在体外适当的 环境下混合培养后可以互相激发，使细胞活化并向母细胞转化，产生分裂增生现象，即为混合淋巴细胞培养方法（MLC）。 现MLC主要用于实体器官移植前的快速相容性检测。分双向MLC和单向MLC HLA基因分型方法 PCR限制性片段长度多态性（PCR-RFLP） 序列特异性引物PCR（PCR-SSP） PCR序列特异性寡核苷酸探针分型技术（PCR-SSO） PCR单核苷酸序列分析（PCR-SBT） 基因芯片 流式细胞术 粒细胞抗原、抗体检测 血清学方法 ①粒细胞凝集试验（GAT） ②粒细胞免疫莹光试验（GIFT） ③单克隆抗体特异性粒细胞抗原捕获试验（MAIGA） ④ELISA方法 ⑤流式细胞术 基因分型技术 主要方法为PCR-RFLP PCR-SSP PCR-SSO等 1、PCR序列特异性引物 2、PCR限制性片段长度多态性 血小板血型抗原 血小板血型抗原主要有两大类： 血小板相关抗原 血小板特异性抗原。 血小板相关抗原：血小板表面存在的与其他细胞或组织共有的抗原 血小板特异性抗原（HPA）：通常将血小板表面由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板特有的遗传多态性，并且不存在于其他细胞和组织上的抗原。 血小板相关抗原 1、红细胞血型抗原：血小板上的ABH抗原物质，包括机体所产生的以及由血浆中黏附在血小板表面的两类抗原构成。 2、HLA系统血型抗原：血小板表面主要存在HLA-Ⅰ类抗原，如HLA-A、HLA-B、HLA-C位点等 血小板特异性抗原 血小板特异性抗原(HPA)是由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板独特