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液相色谱-质谱联用技术的研究进展 许海舰刘翠哲 承德医学院中药研究所/河北省中药与开发重点实验 关键词： 液相色谱-质谱联用（LC-MS）;基本原理;应用进展; 2017-03-26 Received： 2017-03-26 20世纪70年代，液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术开始出现，当时的场解吸 （FD）离子化技术虽然能测定分子量150（T2000Da的非挥发性物质，但重复性 差。后来出现的快原子质谱法（FAB-MS）,对分子量较大的多肽类化合物测定效 果良好。随着现代科学技术的发展，更加精密的化合物分析质谱法一电喷雾离子 化质谱法（ES1-MS）和大气压化学电离源质谱法（APC1-MS）应运而生。本文对 近年来LC-MS的研究应用进行综述。 1质谱仪器 1.1质谱分析法的基本原理 质谱分析法是将物质离子化，并按照质荷比分离，通过测量各离子峰的强度达 到分析目的。以检测器检测到的离子信号强度为纵坐标，离子质荷比为横坐标， 所作的条状图就是常见的质谱图。 1.2质谱仪的组成 1.2.1真空系统： 由机械真空泵、扩散泵或分子泵组成，以抽取离子源和分析器等部分的真空。只 有真空度足够高，离子才能从离子源到达接收器，真空度不够则灵敏度降低。 1.2.2进样系统： 是将所分析的样品导入离子源的装置，包括直接进样、加热进样和参考物进样 等。 1. 2. 3离子源: 是使被分析样品的原子或分子离化为带电粒子（离子），同时对带电粒子加速， 使其进入分析器的装置，0前使用的离子源主要是电喷雾离子源（EST）和大气 压化学电离源（APCI）。 （1） ESI:样品流出毛细管喷门，在雾化气（N2）和强 电场（3-6k V）的作用下迅速雾化，产生高电荷液滴，伴随液滴挥发电场也随 之加强，此时离子移至液滴表而并挥发，产生单电荷或多电荷离子。一般生物大 分子产生多电荷离子，小分子得［M+H］或［M-H］单电荷离子。（2）APCk样品流出 毛细管，通过氮气流雾化到加热管中被挥发，加热管Corona尖端放电电极使溶 剂分子形成反应气等离子体，样品分子和等离子体通过氢质子交换被电离，形 成［M+H］或［M-H］进入质谱仪。 1. 2. 4质量分析器： 现有的质量分析器有串联四极、三重四极杆分析器等。 1.2.5检测接收器： 是接收离子束流的装置，包括电子倍增器、光电倍增器和微通道板。 2 LC-MS分析条件的选择 2.1离子源的选择 ESI是最软的电离技术，适合分析中极性、强极性化合物分子，尤其是在溶液中 能预先形成离子的化合物和可获得多个质子的大分子。APCT亦为软电离技术， 适合分析弱极性小分子物质，不适合分析带多个电荷的大分子。 2.2正、负离子模式的选择 正离子模式用于分析碱性样品，样品由甲酸或乙酸酸化后进行分析。样品中含仲 氨或叔氨的应优先考虑使用正离子模式。负离子模式用于分析酸性样品，由三乙 胺或氨水碱化样品后分析，适合分析含较多强伏电性基团的样品，如含氯、含溴 或多个羟基时可尝试使用负离子模式。 2.3流动相的选择 常用的流动和为中醇、乙腈、水及不同比例的混合物，或一些易挥发盐的缓冲液, 还可通过加入酸、碱调节pH值。LC-MS接U须避免进入不挥发性、含磷和氯的 缓冲液;流动相中含钠和钾的成分应〈lmmol/L,醋酸铵＜5mmol/L,甲酸〈2%、三乙 胺＜1%、三氟乙酸0.5%。进样前，为达到基本分离，应摸好液相条件，且缓冲体 系应符合质谱要求。 2.4流量和色谱柱的选择 不加热ESI目前一般用lmnT2. 1mm内径微柱,最佳流速(1?50) ul/min;采用内 径4. 6mm的LC柱时要求柱后分流。APCI常规使用直径4. 6?的色谱柱，最佳流 速lml/min;小于100mm的短柱町提高分析效率，节省定量分析的时间。 3 LC-MS的应用进展 3. 1杂质的分析 药物在生产、运输和保存过程中，容易引入或自身产生无治疗作用、影响药物稳 定性和疗效的杂质，甚至对人体健康有害的物质。杂质通常量低、种类多，结构 和主药类似，很难检测。杂质的-?般检测方法有TLC、HPLC、NMR和TR,但灵敏 度低，在杂质控制方面的应用受到限制Ul。LC-MS联用技术结合丫色谱的高分 离性和质谱的高灵敏度、高选择性，能提供相对分子质量与结构信息，极大地推 动了杂质研究的发展m。 头孢菌素是最常用的抗生素，具有高效、低毒的特点位1。头孢菌素中的e-内 酰胺环结构不稳定，在生产和运输过程中易产生一系列降解产物和聚合物，从 而失去抗菌活性，甚至产生毒性，在生产过程屮要严格控制杂质的量。LC-MS联 用技术在头孢菌素降解产物UL食品中残留物［5］和生物样品中代谢产物［6-7］ 等检测方面取得了长足的进步。Rourick等U1人用液相串联质谱(LC-MS/MS)