活体生物发光和荧光成像技术应用讲座2016年,7.pptVIP

* 标记免疫细胞观察对肿瘤细胞的识别和清除。 * 带有 LUCIFERASE 基因的 siRNA 对LUCIFERASE 在体内的表达产生抑制, 证明此方法的可靠性. * 用于抗生素筛选是不错的选择。利用标记好的细菌在动物体内对药物的反应，医药公司和研究机构可用这种成像技术进行药物筛选和临床前动物实验研究。 * A型链球菌通过鼻相关淋巴组织进入呼吸道黏膜的侵袭过程。可以用标记好的革兰氏阳性和阴性细菌侵染活体动物, 观测其在动物体内的繁殖部位、数量变化及对外界因素的反应。 * two-step transcriptional activation (TSTA) system * 观察细胞中或活体动物体内两种蛋白质的相互作用，是将荧光素酶基因分成两段，分别连接所研究的两种蛋白之一的编码DNA，然后导入细胞或动物体内表达为融合蛋白。当两种蛋白有强相互作用时，表达的荧光素酶两部分相互靠近形成有活性的荧光素酶，在有底物存在时出现生物发光，反映出所研究的两种蛋白存在相互作用。应用此原理亦可用于研究细胞信号传导途径 。 * 当荧光素酶与抑制多肽以融合蛋白形式在哺乳动物细胞中表达，产生的融合蛋白无荧光素酶活性，细胞不能发光，而当细胞发生凋亡时，活化的caspase-3在特异识别位点切割去掉抑制蛋白，恢复荧光素酶活性，产生发光现象，由此可用于观察活体动物体内的细胞凋亡相关事件。也可以通过使用特殊的底物，DEVD-luciferin，当发生细胞凋亡时，活化的caspase-3会切断DEVD与luciferin的连接，恢复荧光素酶与luciferin的相互作用而发光。 * 荧光素酶(luciferase)是一类生物发光酶，其中的renilla荧光素酶和firefly荧光素酶分别识别不同的底物, 一种细胞可被这两种荧光素酶标记: renilla 荧光素酶基因由一组成性稳定表达的启动子驱动, 作为内参，反应细胞数量的变化; firefly荧光素酶基因由要研究的组织特异性启动子驱动。这样firefly荧光素酶发光信号的变化，在消除细胞数量变化的影响后就可反应特定的启动子在动物体内的表达活性。 * * 利用活体成像技术观察荧光量子点在裸鼠和兔子体内聚集在淋巴结处的发射光强度，从而判断量子点在动物体内定向转移及聚集效果，确定体内所处的具体位置。 * 为研究目的基因是在何时、何种刺激下表达，将荧光素酶基因插入目的基因启动子的下游，并稳定整合于实验动物染色体中，形成转基因动物模型。利用其荧光素酶基因的表达，既与底物作用产生生物发光，代表目的基因的表达情况，从而实现对目的基因的研究。 * 为研究目的基因是在何时、何种刺激下表达，将荧光素酶基因插入目的基因启动子的下游，并稳定整合于实验动物染色体中，形成转基因动物模型。利用其表达产生的荧光素酶与底物作用产生生物发光，反应目的基因的表达情况，从而实现对目的基因的研究。可用于研究动物发育过程中特定基因的时空表达情况，观察药物诱导特定基因表达，以及其它生物学事件引起的相应基因表达或关闭。研究者根据研究目的，将靶基因、靶细胞、病毒及细菌进行荧光素酶标记，同时转入动物体内形成所需的疾病模型，包括肿瘤、免疫系统疾病、感染疾病等等。可提供靶基因在体内的实时表达和对候选药物的准确反应，还可以用来评估候选药物和其它化合物的毒性。为药物在疾病中的作用机制及效用提供研究方法。 * 用荧光素酶基因标记IL-1β 基因 ，形成转基因小鼠，IL-1β 基因与荧光素酶基因平行表达。通过构建这样的平台，来筛选对炎症有关的治疗药物，将是中医药领域应用活体动物光学成像技术的先驱，将极大的促进中医药研究方法学的发展。应用了NighOwl 983小动物活体分子成像系统（Berthold Technologies） 。 * 需要垂询，欢迎各位老师随时联系。我愿意与您们共同学习分子成像技术。这是我的事业，也是我的快乐所在！如果各位老师需要文献资料，欢迎交流，我有很多文献资料和技术资料。正在和药物所、交通大学和复旦大学的很多老师在就实验设计的问题进行沟通。如果需要了解其他单位的应用该技术的进展，也欢迎联系我，我会尽己所能促进该技术的普及和提高！ 电话：021 wanwushu@ 万春丽 * 4H9在荷瘤小鼠中的分布 (U87V3) 50μg cy5.5 labeled 4H9, i.v. 2hr 6hr 24hr 仰卧 右侧卧 * GFP标记的肺癌皮下模型 NightOWL ⅡLB 983 上海肿瘤研究所 2007年 第1周 第2周 第3周 第4周 * 药物的肿瘤靶向性研究 复旦药学院 2007年11月 荧光染料标记药物载体，识别未标记的肿瘤 * 荧光染料（Cy5.5)标记的探针对肿瘤细胞的识别