2015年研究生实验4 电泳与紫外.pptVIP

* * * * * * * * * 2015级研究生生化与分子生物学技术 银 巍 yinwei@mail.sysu.edu.cn 生物化学教研室 1. 重组质粒的酶切后的电泳鉴定(P28) 2. 紫外分光光度法检测DNA含量 (P37) 实验二 原理 在pH8.0（碱性）的环境中DNA的磷酸基团解离，使DNA在该环境中带负电荷，在电场中向正极方向泳动，因为各种DNA分子的电荷数、分子量、构象不同，它们在通过凝胶立体网格时所受的动力和阻力不同，所以泳动的速度有差异，以此达到分离的目的。 DNA显色剂多用EB，它能和碱基间的氢键结合，在紫外光照射下呈橘红色（530nm）的荧光。 * 1、酶切质粒DNA后的琼脂糖凝胶电泳 影响DNA在凝胶中迁移速率的因素： DNA分子的大小 构象 凝胶浓度 电压 缓冲液 不同浓度琼脂糖的凝胶分离范围 琼脂糖浓度（％，W/ V ) DNA分子的有效分离范围（kb) 0.7 0.8-10 0.9 0.5-7 1.2 0.