盘外置管法注射胶原酶溶解髓核的实验分析.pdfVIP

上海第二医科大学硕士学位论文 实验仪器 lLEICACM3050恒温冰冻切片机，LEICA公司 2．SDJ一3超净工作台，上海淀山湖净化设备厂 3．OLYMPUS AH2光学显微镜，OLYMPUS株式会社 4．WZ一50G微型注射泵，浙江大学医学仪器厂 5．TGL一16G离心机，上海医学分析仪器厂 表1实验所用髓核的一般情况 主要试剂 ， l，鼠抗I型胶原单克隆抗体试剂 CHEMICON公司 2．鼠抗I I型胶原单克隆抗体试剂， CHEMICON公司 3．鼠抗III型胶原单克隆抗体试剂，CHEMICON公司 4．羊抗鼠，HRP／DAB二抗试剂盒，LABVISION公司 5．注射用胶原酶1200 u／瓶，乔源制药 6，OCT包埋剂，LEICA公司 7．胃蛋白酶， 源聚生物科技公司 8．多聚赖氨酸， 博士德公司 9．苏木素， FARCO公司 上海第二医科大学硕士学位论文 10．伊红， 上海试剂三厂 11．中性树脂， BDH公司 髓核与胶原酶反应 1．原理： 临床上盘外置管法有多种穿刺途径，L3／4、L4／5采用椎间孔穿 刺法，L5／Sl采用骶管裂孔穿刺法，穿刺成功后在髓核边缘留置导管， 用微型注射泵控制速度，将胶原酶从导管缓慢推入，该方法能准确地 将胶原酶注射到突出的髓核处(图1)。 这次实验是胶原酶溶解髓核的体外实验，我们把腰突症患者住院 行髓核摘除术时所取出的髓核作为实验对象，模仿胶原酶盘外置管注 射法，在髓核上滴注胶原酶溶液，并改变注药速度和给药剂量，观察 短期内髓核的变化和胶原的分解(图2)。 2．方法： 实验所用的胶原酶是乔源公司生产的注射用胶原酶无菌冻干粉 1200 m1 针剂， u／瓶，均为同一批号，使用时将1200u胶原酶用4 0．9％盐水溶解。 实验所用的髓核是腰突症患者住院行髓核摘除术时所取出的髓 核，共有7例，在获得髓核后立刻送至实验室，在无菌条件下，分成 A、B、C、D四组，分别完成以下实验。 取A组髓核放入特制容器中，放置于超净台，在室温下，用微 型注射泵控制滴速，将1200u胶原酶(4m1)以滴速为0．4ml／min 均速滴加在髓核上，模仿临床上在手术室即刻推药法，10分钟推完， 上海第二医科大学硕士学位论文 滴完后再缓滴生理盐水，滴速为0．Olml／min，观察5天。 取B组髓核放入特制容器中，放置于超净台，在室温下，用微 u胶原酶(4m1)以滴速为0．Olml／min 型注射泵控制滴速，将1200 均速滴加在髓核上，模仿临床上置管缓慢滴注法，需6小时以上滴完， 滴完后再缓滴生理盐水，滴速为0．Olml／min，观察5天。 取c组髓核放入特制容器中，放置于超净台，在室温下，用微 型注射泵控制滴速，将2400 均速滴加在髓核上，模仿临床上在手术室即刻推药法，用2支胶原酶 治疗大块突出的病人，滴完后再缓滴生理盐水，滴速为0，Olml／min， 观察5天。 取D组髓核放入特制容器中，用0．996生理盐水代替胶原酶，以 滴速为0．Olml／min均速滴加在髓核上，持续观察5天。 髓核反应完成后，用PBS缓缓冲液冲洗5分钟，将髓核至离心机 离心1分钟，转速为2000次／分，离心后弃上清液，取出髓核进行 下一步实验。 图l胶原酶注射术穿刺示意图 上海第二医科大学硕士学位论文 滴加胶原酶液 及生理盐水