荧 光 蛋 白 (赵宝晶)新.docxVIP

绿色荧光蛋白在生物技术中的应用 赵宝晶2011201154 摘 要：2008年10月8日，诺贝尔化学奖揭晓。日本科学家下村修、美国科学家马丁?沙尔菲及美籍华人钱永健，三人因发现和改造绿色荧光蛋白而获奖也是因诺贝尔奖和钱永健，荧光蛋白再次成为我们关注的热点。本文简要地概述了绿色荧光蛋白的发展历史、应用特点及其在生物技术中的应用，比如分子标记、细胞筛选、融合抗体基因表达检测、活细胞体内的光学感受器等。 关键词：绿色荧光蛋白、生物技术中的应用 Abstrac: October 8, 2008, the Nobel Prize in Chemistry announced. Japanese scientists Shimomura, American scientists Martin ? Shaer Fei and Chinese-American Tsien, for the discovery and transformation of three green fluorescent protein and also because of the Nobel Prize winners and Tsien, fluorescent protein once again become the focus of attention. This paper briefly outlines the history of the development of green fluorescent protein, characteristics and applications in biotechnology applications, such as molecular markers, cell-based screening, antibody fusion gene expression, the bodys living cells such as optical receptors. Keywords: green fluorescent protein, the application of biotechnology 1绿色荧光蛋白(Green fluorescent Protein，GFP) 1.1 GFP的发展历史 上世纪60年代，日本科学家下村修从美国西岸打捞了大量发光水母并带回实验室。他发现这些水母在受到外界的惊扰时会发出绿色的荧光。此后，他进行了大量的实验，终于搞清楚了这种水母的特殊发光原理。原来，在这种水母的体内有一种叫水母素的物质，在与钙离子结合时会发出蓝光，而这道蓝光未经人所见就已被一种蛋白质吸收，改发绿色的荧光。这种捕获蓝光并发出绿光的蛋白质，就是绿色荧光蛋白。 然而，研究者们并没有意识到GFP的应用前景，慢慢就将其遗忘了。直到1992年，普瑞舍克隆并测序了野生型的GFP。但具有讽刺意味的是，基金评审委员会认为普瑞舍的工作没有意义，不愿提供经费。普瑞舍一气之下离开了科学界，将GFP的cDNA送给了几个实验室。后来很多人尝试用该cDNA来表达蛋白，但都失败了。马丁?查尔非就考虑只用它的编码区域来表达达载体中，紫外光或者或蓝光激发，大肠杆菌和线虫细胞内均产生了很美妙的绿色荧光。1994年他在美国《科学》杂志上发表《作为基因标识的绿色荧光蛋白》一文，尽管正文只有一页，却标志绿色荧光蛋白投入实验室应用。 野生型GFP虽然能发出很绚丽的荧光，其也存在一些缺点，比如：它有两个激发峰，因此光稳定性不好；此外，在37摄氏度不能正确折叠也是个很大的问题。为此，研究人员花费了大量实验对其晶体结构进行了探索，以便更好地了解发光基团的组成以及与周围残基的相互作用，对其进行改造。最值得赞叹的就是钱永健在1995年完成的Thr取代第65位的Ser的单点突变，使GFP的激发峰单一化，从而显著提高了GFP的荧光强度和光稳定性。此外，他完成的Leu取代第64位的Phe的单点突变则改善了GFP在37摄氏度的折叠能力。综上就产生了我们常见的增强型GFP,其荧光强度为野生型GFP的35倍。 2007年莫斯科的研究人员Chudakov培育出一种深红色的荧光蛋白质，这种蛋白质发出的光穿透性极强，即使蛋白质位于小动物体内深处，其发出的光也可以穿透生物体被外界看到，这使生物学家能够更方便地监视活生物体的发病和康复过程，而不用侵入式地进行研究。斯坦福大学分子影象中心的科学家Zhen Cheng对这项发现评价道：“红色光对生物体组织的穿透性远胜于其他颜色，正因为此，目前有很多科研人员都在努力培育具有高稳定性的红色荧光蛋白质，但截至目前尚没有