化疗药物筛选膀胱癌干细胞的初步研究-外科学专业论文.docxVIP

化 化 疗 药 物 筛 选 膀 胱 癌 干 细 胞 的初 步 研 究 P relim in a ry resea rch o n ch em oth era p y a g en t so rtin g b la d d er ca n cer ste m cells 院 系 ： 华 山 医 院 专 业 ：外 科 学 （泌 尿 外 专 业 临 床 技 能 型 ) 姓 名 ： 黎 力 平 指 导 教 师 ： 王 翔 教 授 导 师 组 成 员 ： 丁 强 教 授 方 祖 军 教 授 瞿 连 喜 副 教 授 目录 目录 中文 摘 要 1 英 文 摘 要 2 中 英 文 缩 略 词 表 3 m a 4 材 料 和 方 法 10 2 0 ii it 2 5 ^ 2 7 参 考 文 献 28 纖 3 3 在 校 期 间 发 表 论 文 情 况 39 義 4 0 化 疗 化 疗 药 物 筛 选 膀 胱 癌 干 细 胞 的初 步 研 究 中 文 摘 要 目的 ：膀 胱 泌尿 上 皮 癌 是 泌 尿 系 统 的最 常见 的肿 瘤 而 且 预 后 不 良。目前 膀 胱癌 的 治 疗 效 果 并 不 能 令 人 满 意 。早 在 19 7 7年 就 有 学 者 提 出 了 肿 瘤 干 细 胞 （CSC s ) 的假 设 。该 假 设 认 为 肿 瘤 组 织 中 的肿 瘤 干 细 胞 是 肿 瘤 发 生 、转 移 及 复 发 的根 源 。最 近 十 余 年 时 间 里 ，已经 从 实 验 室 成 功 分 离 鉴 定 了急 性 髓 性 白血 病 的肿 瘤 干 细 胞 。虽 然 7至 9种 人 类 C SC s 己被 成 功 分 离 鉴 定 ，但 其 余 大 部 分CSC s还 未 被 分 离 鉴 定 ，包 括 膀 胱 癌 肿 瘤 干 细 胞 。分 离 肿 瘤 干 细 胞 的常 用 方 法 有 3种 。第 一 种 也 是 最 常 见 的 方 法 是 利 用 干 细 胞 表 面 标 志 物 ，应 用 流 式 细 胞 技 术 进 行 细 胞 筛 选 ；第 二 种 是 利 用 普 通 干 细 胞 的 培 养 基 即 无 血 清 培 养 基 的 方 法 分 选 ； 最 后 一 种 则 利 用 侧 群 细 胞 （S P ) 具 有 一 定 干 细 胞 特 性 ，应 用 流 式 细 胞 技 术 分 离S P细 胞 作 为 肿 瘤 干 细 胞 。但 是 以上 3 中方 法 因 为 各 自原 因 都 无 法 成 功 分 离 膀 胱 癌 肿 瘤 干 细 胞 。最 近 有 报 道 使 用 化 疗 药 物 在 动 物 体 内成 功 分选 肝 细 胞 癌 肿 瘤 干 细 胞 。因此 ，本 研 究 基 于 该 研 究 方 法 尝 试 利 用 化 疗 药 物 体 外 初 步 分 选 膀 胱 癌 肿 瘤 干 细 胞 ，验 证 该 方 法 的 可 行 性 。 方 法 ：使 用 丝 裂 霉 素 C 按 一 定 的 浓 度 梯 度 持 续 2 4 小 时 作 用 于 膀 胱 泌 尿 上 皮 癌 T 24 细 胞 系 。 使 用 W ST - 8 细 胞 增 殖 与 细 胞 毒 性 检 测 试 剂 检 测 药 物 对 细 胞 的 抑 制 率 。 获 取 剩 余 的 耐 药 细 胞 进 行 下 一 部 分 实 验 。根 据 抑 制 率 实验 的 结 果 设计 丝 裂 霉 素 C 的 浓 度 为 ：0 .03m g/m l， 0 . 5m g/m l, 2m g/m l , 并 分 别 作 为 实 验 组 B 、C 及 D 组 。 使 用 对 照 组 细 胞 作 为 A 组 。 使 用 流 式 细 胞 仪 检 测 实 验 组 及 对 照 组 细 胞 的细 胞 周 期 。使 用 实 时 荧 光 定 量 PC R 及 免 疫 印 迹 法 分 别 检 测 实 验 组 及 对 照 组 细 胞 中 OCT -4 及 NA N 0 G 的 表 达 。 结 果 ： 细 胞 抑 制 率 实 验 显 示 抑 制 率 有 浓 度 依 赖 性 ， 随 丝 裂 霉 素 C 浓 度 的 上 升 呈 递 增 的 趋 势 。 最 大 及 最 小 抑 制 率 分 别 为 9 2 . 5% ± 1. 0及 64 . 1% ± 1.4 {P 0 .0 0 1) 。在 最 高 药 物 浓 度 的 作 用 下 只 有 7.5% 的 细 胞 存 活 。流 式 细 胞 仪 细 胞 周 期 检 测 显 示 对 照 组 及 实 验 组 D 组 中分 别 有 24 .00% 及 8 3 .9 9% 细 胞 位 于 G。G ,期 ， 15 .33 % 及 6 3 .24 % 的 细 胞 位 于 S 期 （/^ 0 . 0 5 )