实验核酸的提取.pptVIP

Company Logo Company LOGO 实验七 动物组织核酸提取与鉴定 一、实验原理 核酸是生物体最重要的组成成分之一。动物组织细胞中的核糖核酸（RNA）与脱氧核糖核酸（ DNA）大部分与蛋白质结合，以核蛋白的形式存在。因此分离核酸时必须使核酸与蛋白质分离，并除去蛋白质。 本实验是将组织匀浆后加水饱和酚溶液，振荡使蛋白质变性，变性蛋白质溶于酚相或两界面处形成凝胶层。而DNA或RNA则溶于上层的水盐溶液中。在离心后上层的水盐溶液中加入乙醇，核酸不溶于乙醇而形成白色絮状沉淀析出。 DNA与 RNA均由单核苷酸组成，每个单核苷酸中含有磷酸、嘌呤与嘧啶、戊糖（核糖、脱氧核糖)。核酸用硫酸水解后，即可游离出这三种物质。用下述方法可分别鉴定出这三类物质。 Company Logo （1）磷酸：用钼酸铵与之作用可生成磷钼酸，磷钼酸可被氨基萘酚磺酸还原成蓝色钼蓝 （2）嘌呤碱：用硝酸银与之反应生成灰褐色的絮状嘌呤银化合物。 （3）戊糖: A.核糖:用硫酸使之生成糠醛，糠醛与3，5－二羟甲苯综合成为一种绿色化合物 B.脱氧核糖：在硫酸作用下，与二苯胺生成蓝色化合物 Company Logo 二、试剂及器材 钼酸铵试剂 氨基萘酚磺酸 3，5－二羟甲苯溶液 二苯胺试剂 0.9%NaCl 20％三氯醋酸 水饱和酚 预冷的95％乙醇 浓硫酸 5%硝酸银