第三章植物组织培养再生植株.pptVIP

第三章 植物组织培养再生植株 植物组织培养再生植株的途径 植物组织与器官培养基本步骤 1、外植体的选择，建立无菌培养体系 2、无菌培养体系的快速增殖 3、器官发生，形成不定芽或胚状体 4、生根培养与试管苗的移植。 第一节、无菌培养体系的建立与增殖 外植体的选择、灭菌、接种、培养 二、外植体的脱分化——愈伤组织诱导 （一）愈伤组织的形成 1、诱导期（起始期）：分裂准备期； 2、分裂期：细胞从开始分裂到持续分裂的时期； 3、形成期：愈伤组织不再增殖，组织内部 出现“维管组织结节”或“分生组织结节”。 二、外植体的脱分化——愈伤组织诱导 （二）愈伤组织诱导的条件 一般认为，诱导愈伤组织成败的关键主要在于培养的条件，其中，植物生长调节剂是诱导愈伤组织形成的极为重要的因素。 二、外植体的脱分化——愈伤组织诱导 （二）愈伤组织诱导的条件 生长素：启动细胞分裂的重要激素，是植物细胞脱分化、形成愈伤组织过程中不可缺少的物质。 常用的种类有2,4-D , IAA 和NAA , 所需浓度在0.01～10mg/L 范围内； 二、外植体的脱分化——愈伤组织诱导 （二）愈伤组织诱导的条件 细胞分裂素：能够使已脱分化的细胞，或细胞团保持持续有丝分裂。 常用的细胞分裂素是激动素、玉米素和6-BA ，使用的浓度范围在0.1～10mg/L。 生长素和细胞分裂素对保持愈伤组织的快速生长是必要的，特别是两者结合使用时，能更强烈地刺激愈伤组织的形成。 （三）愈伤组织的增殖 二、外植体的脱分化——愈伤组织诱导 （四）优良愈伤组织的特性 增殖能力旺盛； 分散性好，容易建立优良的悬浮系； 有利于再分化，或得再生植株。 第二节 器官发生 离体器官发生 :指培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根（adventitious roots）、不定芽（adventitious shoots）、类原球茎(PLBs)等器官的过程。 由胚性愈伤组织产生胚状体（体细胞胚）:胚性愈伤组织的表面是高度分生组织化的细胞团，其表面可以产生大量的胚状体。 生根培养 对于上述途径所获得的芽，在大多数情况下均需要转移到生根培养若进行生根诱导发育成完整植株。 生根培养基一般要求降低矿物营养的浓度，提高生长素的浓度。具体应根据植物种类而定。 试管苗驯化移栽——Transplanting 炼苗（驯化）：移栽前将培养物不开口，移到自然光照下锻炼2-3d，让试管苗接受强光的照射，使其长得壮实起来，然后再开口炼苗1-2d，经受较低湿度的处理，以适应将来自然湿度的条件 。 植物组织培养再生植株的途径 第三节 植物组织培养常见问题及对策 组织培养常见问题 （一）褐变 （二）玻璃化 (三）污染 （一）褐化现象及预防 1、褐化(nonenzymatic browning reaction )的原因 现象:外植体在诱导脱分化或再分化过程中,自身组织从表面向培养基释放褐色物质,以至培养基逐渐变成褐色,外植体也随之进一步变褐而死亡。 机理：植物材料受伤后 ,体内释放的酚类物质在酚氧化酶的作用下被氧化成褐色的醌类物质。 影响因素:褐化主要与植物材料的基因型和生理状态、取材时期、培养基以及培养条件等有关;在植物、尤其是木本植物组织培养中普遍存在。 （一）褐化现象及预防 2、褐化的预防 1)选择合适的外植体(生理状态、生长部位） 2)培养基的优化筛选 3）使用抗氧化剂（VC、 间苯二酚、硝酸盐） 3）使用吸附剂（活性炭、聚乙烯吡咯烷酮） 4）及时继代培养 （二）玻璃化现象及预防 现象：植物组织培养中出现的半透明状的、畸形的试管植物，试管苗的叶、嫩梢呈水晶透明、水浸状，植株矮小肿胀、失绿，叶片邹缩卷曲，无功能性气孔，无栅栏组织，体内含水量高。 机理：尚不很清楚，可能是培养基渗透势不当，导致乙烯产生，进而激发其它激素和酶的活性，抑制蛋白质、纤维素和木质素的合成，促进叶绿素的分解，形成玻璃苗。 目前研究认为是植物细胞分裂与体积增大的速度超过了干物质生产和积累的速度，植物只好用水分来充涨体积，从而表现玻璃化。 （二）玻璃化现象及预防 预防措施：　　　　　　　　　　 （1）适当控制培养基中无机盐成分，适当提高蔗糖和琼脂浓度，减少含氮化合物的用量，降低培养基的水势。　　 （2）适当降低CTK、GA的浓度。考虑加入适当的脱落酸。 （3）改善培养器皿的气体交换状况； （4） 避免过高的培养温度，增加自然光照 （5）增加继代培养代数 植物组织培养再生植株的途径 一、人工种子的概念 将植物离体培养产生的体细胞胚包埋于含有营养成分和保护功能的物质中，在适宜条件下发芽出苗的颗粒体。（Kamada,1985） 任何一种繁殖体，无论是在涂膜胶囊中包裹的、裸露的或经过干燥的，只要能够发育成完整的植株，均或