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实验五 线粒体和液泡系的超活染色与观察 杭州师范大学 刘姬艳 一、实验目的 1.观察动、植物活细胞内线粒体、液泡 系的形态、数量与分布； 2.学习一些细胞器的超活染色技术 二、实验原理 活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。 活体染色分为体内活染与体外活染。 体外活染又称超活染色，它是由活的动植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 所 用的染料一般为碱性染料。因为它具有溶解在类脂质 (如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。 詹纳斯绿 (Janus green B)和中性红 (neutral red)是常用的碱性染料。 詹纳斯绿Ｂ可专一性地对对线粒体进行活染,这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态 (即有色状态), 呈蓝绿色。 中性红对液泡系的染色具有专一性，将活细胞中的液泡系染成红色。 三、实验用品 1. 器材： 显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖 刀、 载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸 2. 试剂： Ringer液、1/5000詹纳斯绿Ｂ、1/3000中性红 3. 材料：洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦幼根根尖 称取 50mg 詹纳斯绿 B 溶于 5ml? Ringer 溶液中，稍加微热 (30 ～ 40 ℃ ) ，使之溶解，用滤纸过 滤后， 即为 1 ％原液。 取 1 ％原液 l?ml 加入 49ml?Ringer 溶液， 即成 1 / 5000 工作液装入瓶中备 用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。 称取 50mg 詹纳斯绿 B 溶于 5ml? Ringer 溶液中，稍加微热 (30 ～ 40 ℃ ) ，使之溶解，用滤纸过 滤后， 即为 1 ％原液。 取 1 ％原液 l?ml 加入 49ml?Ringer 溶液， 即成 1 / 5000 工作液装入瓶中备 用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。 称取50mg詹纳斯绿B溶于5mL?Ringer溶液中，稍加微热 (30～40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1％原液。取1％原 液l?mL加入49mL?Ringer溶液，即成1/5000工作液装入瓶中备用。 最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。 四、实验方法 (一) 线粒体的超活染色与观察 洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察 1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液１-2滴，洋葱鳞茎内表皮，载玻片于37℃恒温水浴染色10-15min，显微镜下观察．　 (二) 小麦幼根根尖液泡系的中性红染色观察 初生小麦幼苗根尖（１－２cm）纵切面切片，1/3000中性红溶液１滴染色5-10min，载玻片于37℃恒温水浴，盖上盖玻片压扁根尖，显微镜下观察． 五、作业 绘出你所观察到的液泡及线粒体并简要分析