壳聚糖－精氨酸树脂固定化胰凝乳蛋白酶及其性质-应用化学.PDF

第26卷第7期 应用化学 V01．26No．7 CHINESE OFAPPLIEDCHEMISTRY 2009 2009年7月 JOURNAL July 壳聚糖-精氨酸树脂固定化胰凝乳蛋白酶及其性质 肖 燕 王 娟 周小华。 (重庆大学化学化工学院重庆400044) 摘要以具柔性亲水手臂的壳聚糖一精氨酸树脂为载体，用戊二醛交联胰凝乳蛋白酶，获得壳聚精．精氨酸 树脂固定化胰凝乳蛋白酶。最佳周定化条件为：m(酶)：m(载体)=20：1 000、戊二二醛体积分数为1．O％、pH= 5．20、30℃交联60min。固定化酶活力达850U／g，gm为1．83mmol／L，比游离酶增大33．6％，比交联壳聚糖固 定化酶低24．0％。壳聚糖．精氨酸树脂固定化胰凝乳蛋白酶水解时间进程曲线与游离酶基本一致，均在反应 30rain达到最大速率，最适温度为70℃，比游离酶升高lO℃；在75℃时的半衰期可达6．0h，比游离酶提高 d。 约4．3倍；最适pH值为5．92，比游离酶向酸性偏移2pH单位。4℃贮存半衰期为49 关键词壳聚糖，厶精氨酸，胰凝乳蛋白酶，交联，固定化 中图分类号：0636．1；0629．7 文献标识码：A 与游离酶相比较，固定化酶具有稳定性、机械强度好，可反复使用，易分离等优点…。性能优良的载 体是固定化酶成功的关键因素旧．3J。壳聚糖是常用于固定化酶的天然高分子载体，虽亲水性强、生物相 容性好，以其为载体固定化酶的活力回收高HJ，但是，由它固定的酶往往呈凝胶，易降解，机械强度低、 扩散阻力大，活力低且半衰期短，不适宜大规模工业化生产”。。目前，壳聚糖的改性方法主要有交联成 多孔微球【6’及接枝改性o7，8|。前者增加表面积及机械强度，但未增加活性位点及改善固定化酶的微环 境；后者则改善了与酶蛋白的亲和性或增加固定化酶作用的自由度。接枝于高分子骨架上的侧链基团 具有一定自由度，称为‘柔性手臂¨9|，常用的接枝物有二乙烯基砜、丙烯酸及其酯、缩水甘油甲基丙烯 酸盐、聚丙烯睛、双醛淀粉¨引等。Reku等¨¨指出，在载体表面接枝较大分子侧链，可获得活力回收及稳 响酶蛋白定位及传质阻力，获得最佳固定化效果的孔径应为酶直径的2～6倍。交联壳聚糖微球的孔径 一般为微米级，而酶分子的动力学平均直径约为10nm【13]，对其接枝亲水柔性手臂，有利于提高固定化 酶的活力回收及稳定性‘14．15]，目前，尚未见用蛋白质基本组成单位——氨基酸接枝修饰交联壳聚糖微 球，并固定化酶的报道。本文在交联壳聚糖微球上接枝￡一精氨酸，引入约8个碳一碳键长(约12nm)、对 蛋白质亲和的柔性手臂，以戊二醛为交联剂，制备固定化胰凝乳蛋白酶，研究了主要工艺条件以及酶学 性质，以获得活力回收较高、稳定性好、可反复使用的生物催化剂。 1 实验部分 1．1试剂和仪器 000 BR；胰凝乳蛋白酶(1U／g)，牛血清白蛋白(BSA)(Fw：约67000)；50％戊二醛、碳酸钙、石油醚、 丙酮、95％乙醇、土温-80、液体石蜡，以上均为分析纯试剂。 精密酸度计；BA200型生物显微镜。 1．2实验方法 1．2．1 制备壳聚糖一精氨酸树脂8．0g壳聚糖充分溶解于400mL体积分数为1％的HCI中，先用同体 mL体积分数为2．5％的戊二醛及 积、体积分数为0．5％吐温一80的液体石蜡分散10min，再加入40 2008-07—18收稿，2008—11-20修回 通讯联系人：周小华，男，教授；E-mail：zhotom．corn；研究方向：生物化工，药物化学