规范《DBS22012-2013-吉林省食品安全地方标准动物源性食品中沙门菌环介导等温扩增（LAMP）检测方法》.pdfVIP

DBS22 吉 林 省 地 方 标 准 DBS22/012—2013 食品安全地方标准 动物源性食品中沙门菌 环介导等温扩增（LAMP）检测方法 2013 - 12 - 31 发布 2013 - 12 - 31 实施 吉林省卫生和计划生育委员会发 布 DBS22/012—2013 前 言 本标准的附录A是资料性附录。 本标准起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院。 本标准起草人：邵洪泽、王楠、苏双、石春军、刘芳、邢国明、李文东、程荣华、蒋云岩、白翠、 许尧、李佳桐。 I DBS22/012—2013 吉林省食品安全地方标准 动物源性食品中沙门菌环介导等温扩增（LAMP）检测方法 1 警告 使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题，使用者 有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 2 范围 本标准适用于肉、蛋、奶等动物源性食品中沙门菌的筛选检测。 3 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4789.4-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验 GB 19489-2008 实验室 生物安全通用要求 GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403-2008 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 4 技术概要 根据沙门菌属特有的靶序列肠毒素基因序列，设计2对特殊的内、外引物（内引物FIP与BIP，外引 物F3与B3），特异性识别靶序列上的六个独立区域，为增加反应速度，还设计1对环引物（LF与LB）。 利用Bst 酶启动循环链置换反应，在肠毒素基因序列启动互补链合成，在同一链上互补序列周而复始形 成有很多环的花椰菜结构的茎环DNA混合物；从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2+结合，产生 副产物（焦磷酸镁）形成白色沉淀，加入显色液，即可通过颜色变化观察判定结果。 5 引物与试剂 5.1 特异性引物 根据沙门菌的肠毒素基因，设计LAMP检测引物，序列见表1。 1 DBS22/012—2013 表1 特异性引物浓度及序列 引物种类 引物名称 核苷酸序列 F3 5-CCTTTCCCGCTATCGGTAAC -3 外引物 B3 5- GGATGCCCAAAGCAGAGAG -3 FIP 5 -G