刺糖多孢菌基因工程菌构建与多杀菌素生物合成分析.pdfVIP

together, a metabolic link between FAS, β-oxidation and spinosad biosynthesis at the presence of exogenous fatty acid was established . The results presented in this study enable researchers to better understand why fatty acid addition can increase polyketides production. KEY WORDS ：spinosad; Saccharopolyspora spinosa; spinosad biosynthesis; gene expression; gene 目 录 第一章 文献综述 1 1.1 生物农药简介 1 1.2 多杀菌素概述 2 1.2.1 多杀菌素的发现及其结构2 1.2.2 多杀菌素理化性质 3 1.2.3 多杀菌素的生物活性4 1.3 多杀菌素生物合成途径及菌种改造 6 1.3.1 多杀菌素的生物合成途径 6 1.3.2 S. spinosa 合成多杀菌素所涉及的基因 7 1.3.3 多杀菌素合成菌种改造 8 1.4 刺糖多孢菌发酵过程研究 9 1.5 刺糖多孢菌生长微环境研究 10 1.6 多杀菌素研究展望 12 1.7 本课题主要研究内容 14 第二章 利用代谢工程逐步提高多杀菌素产量 15 2.1 前言 15 2.2 材料和方法 16 2.2.1 实验材料 16 2.2.2 实验方法 20 2.3 结果与讨论 23 2.3.1 结果 23 2.3.2 讨论 26 第三章 刺糖多孢菌RT-PCR 研究中参照基因的选择 28 3.1 前言 28 3.2 材料与方法 29 3.2.1 实验材料 29 3.2.2 实验方法 30 3.3 结果和讨论 31 3.3.1 采样时间点 31 3.3.2 参照基因RT-qPCR 测定 32 3.3.3 参照基因数据分析 33 3.3.4 小结 36 第四章 外源脂肪酸通过上调多杀菌素合成途径和增加 acetyl-CoA 和 malonyl-CoA 浓度提高多杀菌素产量 37 4.1 前言 37 4.2 材料和方法 38 4.2.1 实验材料 38 4.2.2 实验方法 38 4.3 结果42 4.3.1 脂肪酸添加时间和浓度对多杀菌素生产和细胞生长的影响42 4.3.2 对脂肪酸β氧化，脂肪酸从头合成和多杀菌素合成的基因转录水平分析...43 4.3.3 乙酰辅酶A 和丙二酸单酰辅酶A 胞内浓度变化44 4.4 讨论45 第五章 结论与展望48 5.1 结论48 5.2 展望49 参考文献 51 发表论文和参加科研情况说明 62 致 谢 63