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实习内容二 灭菌 一、实验目的 二、材料和用具 高压灭菌锅、烘箱、培养基、吸管、灭菌水、培养基等。 三、内容与方法 1.器具的消毒: 2.工作场所的消毒: 3.分离材料的表面消毒: 2.灭菌:应用物理的或化学的方法把材料中或物体上的所有微生物全部杀死。经灭菌的物体处于无菌状态，如灭菌水、灭菌培养器皿。 2.1 高温灭菌 2.2 过滤灭菌 2.3 紫外线灭菌 2.4 电离辐射灭菌 2.5 化学灭菌 (二) 培养基的灭菌 灭菌：是指用物理或化学的方法完全杀死器物表面及其内部的所有微生物。 消毒：是指消灭器物表面或植物组织表面的某些微生物，而不是消灭所有的微生物。 植物病理实验室学常用的灭菌方法有干热灭菌和湿热灭菌两种，一般培养皿、吸管等玻璃仪器用干热灭菌法进行灭菌；而培养基和实验用的土壤，则用高压蒸汽灭菌法进行湿热灭菌，具体灭菌方法和步骤如下： 1. 干热灭菌： (1)将培养皿、吸管等玻璃器皿洗净干燥后，用旧报纸包好，或装入特制的铁筒中(每个吸管用纸包好后装入铁筒)，包纸时应将吸取的一端放在取时先拆开的一端，以便取用时手勿触及要求灭菌的一端。 (2)将包装好的玻璃仪器摆入电热烘箱中，彼此间留有一定的空隙以便流通空气。 (3)关紧箱门，打开排气孔接上电源。 (4)待箱内空气排出到一定程度时，闭上排气孔，继续加热至一定温度后，固定温度，灭菌温度一般160℃～180℃保持1小时即可。(5)待自然降温冷却后(60℃以下)才能开门取出玻璃器皿，避免由于温度突然下降而引起玻璃器皿碎裂。 2.湿热灭菌：使用高压灭菌锅，利用高压来提高蒸汽的温度，达到完全灭菌的目的。其操作步骤如下：(1)关好排水阀门放入清水至标度为止，注意水量一定要加足，否则容易造成事故。 (2)将要灭菌的培养基、水等装入铁丝笼中，并用牛皮纸盖好后放入灭菌锅中，关上器盖，旋紧螺旋时，先将每个螺旋旋转到一定程度(不要太紧)，然后再旋紧相对的两个螺旋，以达到平衡旋紧，否则易造成漏气，达不到彻底灭菌的目的。 (3)通电加温，同时打开排气阀门，排尽锅内的空气，即阀门冲出的全部是蒸气时则表示彻底，此时可关闭排气阀门，如果过早关闭阀门，排气不彻底，也达不到彻底灭菌的目的。通常先关闭阀门，当压力表指针升至0.5磅时，打开排气阀门放气，降至零点，再关闭阀门。 (4)压力表的指针上升时，锅内温度也逐渐升高，当压力表指针升至0.15磅时，蒸气温度相当于120℃～121℃(等于一个大气压)，此时开始计算灭菌时间，控制热源，使处于0.1~15磅压力保持30分钟，即能达到完全灭菌的目的，然后停止加温。 (5)稍微打开一点排气活门，使锅内蒸汽缓慢排除，然后逐渐开大活门，气压徐徐下降，注意勿使排气过快，否则会使锅内的培养基沸腾而冲脱或沾湿棉花塞，但排气太慢又使培养基在锅内，受高温处理时间过长，这样对培养基也是不利的。一般从排气到打开锅盖以10分钟左右为好。 (6)当压力表指针降到零、锅内蒸气完全排尽时，打开锅盖取出培养基，如需制备固体斜面培养基时，则应趁热将试管斜放在桌上，上面盖上报纸以免落灰尘，冷却后便可收起。 (7)最后将高压灭菌器内的剩余水排出。 * * 通过实际操作，了解消毒和灭菌的常用方法和适用范围，掌握干热灭菌和高压湿热灭菌的操作方法。 1 消毒：应用化学或物理的方法杀死材料中的或物体上的绝大多数微生物，尤其是能致病的病原微生物，使之不会引起有害或有毒的反应。