中图版选修第一章第节《测定微生物的数量》ppt课件.pptVIP

第3节　测定微生物的数量;学习导航 1.概述微生物计数的基本方法。 2.运用稀释平板法测定样品中微生物的数量。[重、难点];; 3.优点 4.缺点：难以计数______的细菌。 5.适用范围：一般适用于纯培养悬浮液中各种____________的计数。 二、间接计数法 1.常用方法：________________。;2.具体步骤：需要将待测样品配制成均匀的____________并使其均匀分布于平板中的培养基内，经过培养后，统计培养基中出现的________,即可推算出检测样品中的活菌数。 3.优点：在样品中含菌数_______的情形下也可以完成计数。;判一判 (1)在用直接计数法测量培养瓶中酵母菌时，应在培养液静置一段时间后，从瓶底部吸取液体样本。(×) (2)用稀释平板计数法，通过观察菌落，得出的数值往往比实验值要大。(×) (3)在计数时，用于培养的器皿要进行灭菌。(√);三、间接计数法实例 1.土壤中好气性细菌的计数 (1)制备土壤稀释液 取土壤表层_____________处的土样。准确称取1 g土样，放入盛有___ mL无菌水的锥形瓶中，振荡20 min后制成102倍的稀释液。然后进行系列稀释，得到103、104、105、106的系列稀释菌液。;(2)取样及倒平板：每个号码设置__个重复。 (3)培养。 (4)观察记录 ①计数时对于细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有__________个菌落为宜。霉菌以每个培养皿内有__________个菌落为宜。;2.检测天然水源中细菌总数和大肠菌群数 (1)细菌总数通常是指1 g或1 mL检测样品中所含__________的总数,单位用cfu/g(mL)表示。;(2)大肠菌群数通常是指每100 g或100 mL检测样品中所含大肠菌群的实验数值，以(MPN)表示。大肠菌群是指在____℃条件下，24 h内能发酵______，产酸产气的一类___氧或_______氧型革兰氏阴性无芽孢杆菌的总称。大肠菌群数的检测，常用__________法，使用乳糖胆盐蛋白胨培养基、___________琼脂培养基(EMB培养基)和乳糖发酵管。;3.土壤中分解尿素细菌的计数 有些细菌含有__________酶，能将尿素琼脂培养基中的尿素分解生成氨，氨溶于水变成氢氧化铵，导致培养基变成____性，使酚红指示剂呈现____色。;想一想 土壤有“微生物的天然培养基”之称，为什么？ 【提示】　由于土壤具备了各种微生物生长所需的营养、水分、空气、酸碱度、渗透压和温度等条件，是微生物生活的良好环境。对微生物来说，是微生物的“大本营”；对人类来说，是最丰富的“菌种资源库”。;;(2)方法：用计数板计数。计数板是特制的载玻片，其上有特定的面积为1 mm2，高为0.1 mm的计数室，一个计数室又被分成25个(或16个)中格，每个中格再被划分成16个(或25个)小格，每个计数室都由400个小格组成。 ;(3)操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4～5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按计算公式求出每毫升样品中所含的细菌数。 (4)计算公式 每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数 (5)缺点：不能区分死菌与活菌。;2.间接计数法(活菌计数法) (1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。;(2)操作 ①设置重复组,增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上,经涂布、培养，计算出菌落平均数。;②为了保证结果准确，要选择一个合适的稀释倍数，且同一稀释倍数的各个重复组菌落数要相近，若设置的重复组中结果相差太远,意味着操作有误，需重新实验。 (3)优点：能观察菌落特征。; 在探究培养液中酵母菌种群数量变化的实验中，需利用计数板对微生物细胞进行直接计数。计数板是一个特制的可在显微镜下观察的载玻片，样品就滴在计数室内。计数室由25×16＝400个小室组成，容纳液体总体积为0.1 mm3。某同学操作时将1 mL酵母菌样品加99 mL无菌水稀释，用无菌吸管吸取少许使其自行渗入计数室，盖上盖玻片并用滤纸吸去多余菌液，进行观察计数。;(1)在实验中，某同学的部分实验操作过程是这样的：①从静置试管中吸取酵母菌培养液加入计数板进行计数，并记录数据；②把酵母菌培养液放置在冰箱中；③第七天再取样计数，记录数据，统计分析绘成曲线