低共熔溶剂双水相体系的构建与其萃取生物分子的分析.pdfVIP

摘 要 双水相萃取技术是一种新的分离和提取生物分子的液液萃取技术，其操作程 序时间短，成本低，操作条件温和，并可规模化应用。低共熔溶剂 (DESs) 与盐 形成的双水相是基于高聚物双水相发展而来的一种可设计，更高效的萃取体系。 本文引入离子液体类似物：低共熔溶剂。与离子液体相比，它合成简单，成本低 廉，具有良好的生物相容性，且更绿色环保。 本课题深入研究了低共熔溶剂-盐双水相体系的液液相平衡行为及其分相能 力，为其更进一步的应用提供了充分的理论依据。在此基础上构建了DESs 双水 相萃取体系，研究了该新型体系对氨基酸和蛋白质的萃取性能。主要研究结果如 下： (1) DES-盐双水相体系的液液平衡性质研究 首先合成了低共熔溶剂 (氯化胆碱和聚乙二醇)-DES ，并用熔点测定仪、元 素分析仪、动态热流式差示扫描量热仪、红外光谱和核磁对其对其熔点、元素含 量、热稳定性、红外谱图和核磁氢谱进行了表征。然后构建DES-盐双水相体系， 研究其相图的性质：双结线和系线。用浊点滴定法测定双结线数据，通过测定上 下相各组分的含量，用物料守恒计算系线相关数据。结果表明，Na C H O 、 3 6 5 7 K HPO 、NaH PO 和 Na CO 均能与 DES 构成双水相，其成相能力依次为： 2 4 2 4 2 3 Na CO Na C H O K HPO ≈ NaH PO 。双结线拟合结果表明，该类双水相 2 3 3 6 5 7 2 4 2 4 体系对经验方程 w = exp (a-bw 0.5-cw -dw )拟合的线性相关性最好。同时， 1 2 2 2 DES-K HPO 双水相体系的系线长度最长，表明了该体系的两相组分差异最大。 2 4 (2) DES-盐双水相体系萃取分离色氨酸的研究 考察了四种不同盐 (Na CO 、Na C H O 、K HPO 和NaH PO ) 与DES 形 2 3 3 6 5 7 2 4 2 4 成的双水相对色氨酸的萃取效果，采用紫外光谱对色氨酸进行定性及定量分析。 用单因素实验分别对四种双水相萃取体系进行了实验变量的优化，包括氨基酸的 初始浓度、DES 用量、盐的用量和体系的温度。结果表明，在最佳条件下， DES-Na CO 双水相、DES-Na C H O 双水相、DES-K HPO 双水相和 2 3 3 6 5 7 2 4 DES-NaH PO 双水相体系对色氨酸的萃取率分别可达到84.54%、76.14%、91.97% 2 4 I 和 87.03%，DES-K HPO 双水相体系萃取分离色氨酸的效果最好。通过紫外光 2 4 谱及荧光光谱对色氨酸萃取前后的化学结构进行考察，发现色氨酸萃取至富DES 相后结构没有发生改变。 (3) DES-K HPO 双水相萃取分离牛血清蛋白 (BSA) 和木瓜蛋白酶 (PAP) 研究 2 4 选取DES-K HPO 体系萃取分离牛血清蛋白 (BSA) 和木瓜蛋白酶 (PAP)， 2 4 考察蛋白质浓度、DES 用量、K HPO 用量和体系温度对萃取效果的影响，优化 2 4 萃取条件。采用紫外可见光谱法对蛋白质BSA 和PAP 进行定