贵州杂交玉米纯度检验与其指纹图谱的构建.pdfVIP

贵州大学硕士论文 贵州杂交玉米纯度检验研究及其指纹图谱构建 ，1RH．】¨¨U 日 玉米是我国主要粮食作物之一，目前生产上95％以上均使用杂交种，但用于组配杂交种的自 交系由于种子生产的经营管理或环境因素的影响，可能会造成纯度降低。玉米常年播种面积0．24 亿公顷，其中杂交玉米面积占80％以上，常年制种面积30万公顷，制种总产超过7．0亿公斤(陈 一华等，2000)。因此，杂交玉米的种子质量对于我国粮食安全、农业生产的发展、农民收益的 提高以及我国种业的兴衰成败等意义十分重大。 根据GB／T3543—1995《农作物种子检验规程》国家标准，种子质量包括品种品质(种子的真 实性和纯度)和播种品质(净度、生活力、千粒重、容重、水分、种子病虫感染率、色泽等)，在 我国国家标准甚至国际标准中通常利用纯度、净度、发芽率和水分这四项指标来衡量种子质量并 以此定级，其中，又以纯度最为重要，种子纯度的降低会明显降低作物的产量和品质，同时也是 种子生产和质量管理中最棘手的问题。目前我国种子质量的问题比较严重，一些不法分子为追求 经济利益频频购销假冒伪劣和纯度严重超标的种子，严重影响了正常的农业生产以及优良品种的 增产效益，给国家和农民造成了巨大的无法弥补的损失。据国家工商局统计，在主要农作物的种 事件屡屡曝光，受害面积达4万余亩(钱前等，1996)：湖北广水的“汕优63”全是常规稻假冒：1993 年的假冒“鲁单50”造成损失达300万元：汝城县的假“汕优63、协优63”事件更是轰动全国。 目前我国玉米大田用种纯度在90％左右，全国玉米仅因纯度一项每年减产40亿公斤。同时，涉 及作物品种权争议的事例也在逐年增加(张余良等，1998)。尤其是近年来在市场经济条件下，国 内一些种子繁育和经营单位及个人片面追求产量而忽视种子质量，甚至混杂掺假，以次充好，造 成玉米种子质量严重滑坡，极大地损害农民的利益。据国家抽查，1993—1995年的玉米种子合格 率分别为2．896、8．6％、9．o％，其中杂交种的合格率分别为0、1．6％、1．3％，最突出的问题是纯度 差，三年平均纯度为87．7％，距离国家技术监督局颁布实施的种子质量标准关于二级杂交种纯度 别为95．5％、97．4％，尽管有所上升但仍然低而不稳定”1。据统计，玉米种子纯度在国家标准以下 有种子纯度下降1％，则每年将减产约50亿kg，由此可见因纯度低而导致的减产完全有可能抵消 一个优良品种的增产潜力。导致这种现象的原因一方面是由于我国种子经营渠道多、乱、杂，没 有推行种子认证制度，从而难以保持品种的真实性：另一方面是由于缺乏准确可靠、简便快速的 品种遗传纯度检测方法。因此，对杂交玉米种子纯度的快速、准确、有效的鉴定显得十分必要。 ．d． 贵州大学硕士论文 贵州杂交玉米纯度检验研究及其指纹图谱构建 此外，为使育种者的知识产权得以保护，解决与品种专利权有关的问题，也迫切需要对新品种、 新品系、新种质进行鉴定。解决这一问题的有效途径是对品种的遗传纯度进行检测，将不合格的 种子予以淘汰。 玉米种子纯度鉴定传统上主要采用形态学方法、同工酶电泳、种子贮藏蛋白电泳。形态学鉴 定所利用的形态性状数量有限，且易受环境条件影响，其准确性较差。同工酶电泳和种子贮藏蛋 白电泳由于可利用的位点和类型有限，对亲缘关系较近的材料难以区分。随着分子生物学的发展， 在80年代后期分子标记技术开始用于检测玉米种子纯度。Smith利用RFLP技术用38个探针准 确鉴别了78个玉米杂交种，而且其中许多是用同工酶和蛋白质电泳技术难于区分的品种。但RFLP 技术对DNA的需要量大，技术也较复杂，需要对探针进行同位素标记，即使应用非放射性的 Southern杂交技术，仍然耗时费力。90年代初发展起来的RAPD技术，以其简便、快速、易操作 等优点，已在作物品种鉴别上得到了广泛研究。RhPD其操作中可用的引物很多，核苷酸序列互 不相同，能更好地鉴定DNA多态性，加上其所用的是随机引物，预先不需要知道其碱基序列，再 配之以PCR扩增仪，使操作简单，便于大量样品的分析。该法简单易行，DNA需要量少，实验耗 时少，成本低，又能大量揭示从形态和生化指标上无法检测到的丰富差异，所以RAPD技术是在 种子生产、经营及质检等部门大量推广利用最有潜力的方法。但扩增产物的稳定性差，多数位点 的标记带表现为显性，不能提供完整的遗传