课件：临床常见标本的微生物检验.ppt

（二）标本运送和保存 标本采集时，无菌手续以稍蘸肉汤的拭子采集病变明显处的脓液和分泌物。采取后拭子应置于运送培养基或培养拭子运送，以防干燥。立即送检，如不能及时送检，应置于４℃冰箱保存，超过48h不可使用。 （三）标本的接种 一.直接涂片： 取拭子制成2张涂片，1张行革兰染色，1张行美蓝或异染颗粒染色。做初步报告，便于选择培养基。 二.接种于培养基： 一般细菌接种于血平皿、巧克力平皿、中国蓝或麦康凯上，置于35℃、5%CO2温箱内，18-24小时后观察。 疑似白喉杆菌时接种于吕氏血清斜面或鸡蛋培养基上； 疑似百日咳杆菌感染时接种于包-金平板； …… 九、 组织标本 根据不同的病变部位，炎症或坏死组织部位，采用相应的方法采集组织标本。 （一）表浅组织 表浅的感染组织和各种窦道标本可用棉签擦拭、小刀刮取、穿刺抽吸或手术切除。对窦道和瘘管应深部刮取管壁组织。 1．皮肤、黏膜、指甲 用棉签或小刀擦取或刮取，也可用手术切除或穿刺抽取置无菌试管送检。 2．牙周 穿刺活检或抽取炎性分泌物置无菌的容器内送检。 3．窦道、瘘管 用深部刮取术，采集一小部分管壁组织，置无菌的容器内送检。 采集时间 一般表浅皮肤黏膜组织在使用抗菌药物之前采集。 （二）深部组织 深部组织标本可经皮肤穿刺采集或手术切取。标本置无菌容器并加少量生理盐水以保湿度，或置肉汤增菌液，或置血平皿送检。如果怀疑为厌氧菌感染，应把组织放入厌氧的传输系统内立即送检。 采集各种深部组织活检之前，应严格进行皮肤消毒后才行无菌穿刺采集。 采集时间 深部组织 包括肺、脑、胃、十二指肠等腹部脏器、支气管、淋巴结、附件、扁桃体等，在手术或内窥镜检查时采集。 （三）作病原体分离的组织标本，不可用福尔马林固定。疑有污染的较大组织块，可用烧红的烙铁烧灼其表面或置沸水中5～10s使表面变白消除污染后，再用无菌器械切开组织，取中央部位组织送检。 怀疑军团菌感染时，肺组织切片不要加入生理盐水，因为生理盐水可抑制军团菌生长。 各种活检组织标本，在常温下保存最长时间为24h。 标本处理 （1）定性培养： 剪成碎片→加入无菌肉汤→研磨→接种相应培养基，同时涂片观察→结果判断。 （2）定量培养： 标本称重→每克加入1ml无菌肉汤，制成悬液→与增菌肉汤按一定比例混匀→接种相应培养基，同时涂片观察→结果判断。 （一）采集时间 腹泻患者应在急性期，并尽可能在使用抗生素之前采集新鲜粪便；伤寒患者在发病2周以后。 （二）采集方法 1．自然排便采集法 自然排便后，挑取有脓血或黏液部位的粪便2-3g ，液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内或置于保存液或增菌液中送检。 2．直肠拭子采集法 对不易获得粪便或排便困难的患者及婴幼儿，可采用直肠拭子法采集标本，其方法是将拭子前端用甘油湿润。然后插入肛门约4～5cm（幼儿约2～3cm）处，轻轻在直肠内旋转，擦取直肠表面粘液后取出，盛入无菌试管或保存液中送检。 （三）实验室检查 肠道细菌大多为革兰阴性杆菌，且因粪便标本中有各种正常菌群，形态上区分困难，因此一般不做直接涂片检查。 只有当临床怀疑肠道菌群失调或检查霍乱弧菌、结核分枝杆菌、疑似葡萄球菌或难辩梭菌引起的伪膜性肠炎以及真菌性腹泻时，才做直接涂片检查。 疑似葡萄球菌引起的抗菌素相关性肠炎，可取水样便或肠黏膜样物涂片，革兰染色后镜检，见革兰阴性杆菌明显减少，革兰阳性球菌大量散在或成堆（葡萄状）排列，可提示肠道菌群失调。 （四）注意事项 在腹泻发病的正确时间收集标本，病人应尽量在急性期（3d）内和用药前采集标本，以提高检出率。 大便标本中含有很多杂菌，粪便标本的采集须注意防止外界脏物污染，尽量采用无菌容器。 为提高阳性检出率，要采集新鲜标本，立即送检。 标本接种 一 细菌性痢疾、伤寒感染（沙门、志贺） 取标本接种于SS琼脂平板或麦康凯平板或XLD平板，置于35℃普通温箱，18-24小时后观察。 二 伪膜性肠炎（难辨梭状芽孢杆菌） 接种于CCFA平板和厌氧血琼脂平板，置于37℃普通温箱，48小时后观察。 三 霍乱感染 标本接种于碱性蛋白胨水， 35℃培养6-8h后转种于庆大霉素琼脂平板或SS琼脂平板， 35℃普通温箱，18-24小时后观察。 四 其他感染 真菌、小肠结肠炎耶尔森菌、空肠弯曲菌。。。。。。 接种方式 四区划线，每区均换环。 五、 生殖道标本 （一）送检指征1. 男性泌尿系统表现 尿急、尿频、尿痛 尿道