课件：结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术.ppt

TB-RNA提取 恒温扩增 实时检测 60°C 10 min 42°C 5 min 超声仪（300W） 15 min 痰液预处理 42°C 40 min 50 ul 稀释液 TB-SAT操作步骤 实验室诊断新技术 培养鉴定结果+PCR结果 合计 TB-SAT检测结果 阳性 阴性 阳性 231 7 238 阴性 12 318 330 合计 243 325 568 敏感度=231/243×100%=95.06% 特异性=318/325×100%=97.85% 准确度=(231+318)/568 ×100%=96.65% 恒温扩增-SAT技术 TB-SAT检测的敏感度和特异性 实验室诊断新技术 （四）蛋白分子诊断技术-γ-干扰素释放实验 结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-γ） 由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状。 基于IGRA原理的产品目前已被美国、加拿大、英国、德国、法国、日本等二十余个国家写入本国的结核诊疗指南中 （IGRA，interferon- gamma release assay） 实验室诊断新技术 检测过程与结果判断 阴性结果 阳性结果 空白对照 抗原 A 抗原 B 阳性对照 （PHA） 实验室诊断新技术 美国FDA认证临床实验数据 经培养确诊的结核病患者样本183例 敏感度 95.6%(175/183) 306例入伍新兵 特异性 97.1%(297/306) T.SPOT.TB 检测的敏感度和特异性 国内临床实验数据 T-SPOT.TB 确诊病例 合 计 试验组 对照组 阳 性 624 30 654 阴 性 31 478 509 合 计 655 508 1163 灵敏度=95.3%；特异性=94.1%；准确性=94.8% T.SPOT.TB特点： 特异性好，不受卡介苗（BCG）接种和环境分枝杆菌影响 敏感度高，在免疫力低下/受抑制人群中有很高的检出率 快速，24小时报告结果 实验室诊断新技术 题目结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术 敬请各位专家批评指正！ 郑州大学第一附属医院检验科 / 河南省检验医学重点实验室 赵俊伟 2015年12月 * * 这里从反应条件、扩增产物和检测方法这几个方面对比了当前主流的核酸扩增技术。 其中只有PCR是热循环的，其他都是恒温条件。 扩增产物上，PCR、LAMP、SDA都是DNA，NASBA、TMA、SAT的扩增产物为RNA。 从检测方法上，只有TMA是终点法，其他都是实时检测 这是SAT的技术原理：在同一温度下，首先通过M-MLV反转录酶产生靶标核酸（RNA）的一个双链DNA拷贝，然后利用T7 RNA 聚合酶从该DNA拷贝上产生多个（100~1000个）RNA拷贝；每一个RNA拷贝再从反转录开始进入下一个扩增循环；同时，带有荧光标记的探针和这些RNA拷贝特异性结合，产生荧光。该荧光信号可由荧光检测仪器实时捕获，直观反映扩增产物的产生。 结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术 赵俊伟（Ph.D, 主管技师） 联系方式：edward35@126.com 郑州大学第一附属医院 检验科 河南省检验医学重点实验室 2015年12月 中国 郑州 结核病又称为痨病和白色瘟疫。 公元三世纪以前，我国古代医学还只是认识到该病可能是一种极为严重的慢性传染病，“累年积月，渐就顿滞，以至于死，死后复转旁人，乃至灭门”。以后逐渐认识到这是一种“肺痨”，其病因为“痨虫”所致。 后来，西方的一些科学家发现这类病人的肺内有一个个坚实的团块，摸上去像土豆或花生这类植物的根上块茎，就将该病称之为Tuberculosis，即结节的意思，这就是结核病命名的由来。 结核病 《红楼梦》：香魂一缕随风散，愁绪??三更入梦遥。 虽然说《红楼梦》与医学无关，但其作者笔下的“痨病”代表林黛玉却惊动全世界。 上世纪50年代，美国细菌学家杜博斯所写的《The White Plague》(白色瘟疫)，就曾提到了林黛玉的肺结核，可见在当时《红楼梦》中林黛玉的病症已是结核病的典型症状。 《黄帝内经素问》：“大骨枯稿，大肉陷下。胸中气满，喘息不便，内痛引肩项，身热，脱肉破腘。” 结核病 结核病目前仍然是一个全球性的严重的公共卫生问题。 结核病 流行过程 传染源 痰涂片阳性的肺结核病人 传播途径 空气传播 易感人群 普遍易感 第二节 流行病特征 影响流行的因素 自