凯基NAD+NADH比色法检测试剂盒.PDFVIP

+ 凯基NAD /NADH 比色法检测试剂盒 说明书修订日期 Cat number KGT650-1/KGT6100-1 ： Storeat -20 foroneyear ℃ ForResearchUseOnly 一、 试剂盒说明 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)是在细胞中找到的 两个重要的辅因子。NADH 由NAD+加H还原得到，NAD+由NADH氧化而来。在腺嘌呤核苷酸的 2’位通过酯键连接加上一个磷酸基团，构成NADP。NADH作为氢的载体，在呼吸链中通过化 学渗透偶联的方式，合成ATP。NADH分子是线粒体中能量产生链中的控制标志物。NADH水 平的上升指示代谢失衡的出现。监视NADH 的氧化还原状态是表征活体内线粒体功能的最佳 参数。传统的NAD/NADH和NADP/NADPH 的检测是通过测定NADH或者NADPH在340nm处的吸 光值。这种方法灵敏度低，且受严重干扰；因为检测在紫外光范围内，需要昂贵的石英微孔 板。本试剂盒提供简单便捷的方法检测样品内NAD,NADH 的含量以及比例。试剂盒提供的循+ 环反应酶能够特异性的识别底物NAD/NADH，并且不需要对混合样品中的NAD/NADH进行纯+ + 化。 本检测法适用于96孔板或384孔板，显现出高灵敏度和干扰小，在570nm 出检测。本试 剂盒可以测定100个样品。 二、 试剂盒组份 组 份 Cat:KGT650-1 Cat:KGT6100-1 储存条件 50 assays 100 assays + NAD 提取液 2.5ml 5ml NADH 提取液 2.5ml 5ml 酶反应液 125U 250U 试剂A 2.5ml 5ml -20°C,避光 显色液 2.5ml 5ml 标准品 71µg 142µg 试剂B 2.5ml 5ml 试剂C 2.5ml 5ml 试剂D 7.5ml 15ml 说明书 1个 塑料袋 1个 三、 试剂盒以外自备仪器和试剂 荧光检测器，PBS。 四、 操作方法 标准曲线绘制：取200µL1XPBS，pH8.0缓冲液加入到标准品NADH 中配成1mM NADH标准 品储液。取5ml1XPBS，pH8.0缓冲液加入到250U循环反应酶中，分装在5只1.5mLEppendrof Tube 中，放置于-20ºC 冰箱保存。取 10µL NADH 标准品储液，通过稀释得到 1µM， 0.3µM,0.1µM,0.03µM,0.01µM标准品系列稀释溶液。取25µL标准品系列稀释溶液/1XPBS， pH8.0缓冲液blank分别加入到96孔板中，加入试剂A，试剂B，试剂C，显色液各12.5µL； 加入75µL循环反应酶溶液使每孔总量达到150µL，避光反应1.5h。反应结束后用移液枪吸 出孔内溶液，加入150µLDMSO复溶，在紫外分光光度计下检测Absorbanc