miR18396182簇及miR135a控乳腺癌恶性进展研究.docx

中国科学技术大学学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的 中国科学技术大学学位论文原创性声明 本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的 成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何他人已经发表或 撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中作 了明确的说明。 作者签名：j雄 签字日期：渺r·p 中国科学技术大学学位论文授权使用声明 作为申请学位的条件之一，学位论文著作权拥有者授权中国科学技术大学 拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权按有关规定向国家有关部门或机构 送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文编入《中 国学位论文全文数据库》等有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描 等复制手段保存、汇编学位论文。本人提交的电子文档的内容和纸质论文的内 容相一致。 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 导师签名： 丝 签字日期： yff r·p 万方数据 摘要摘要 摘要 摘要 第一部分：人生长激素不仅在乳腺发育过程发挥重要作用，也有证据显示 自分泌的人生长激素促进乳腺上皮细胞的恶性转化。之前我们报道生长激素通 过促进乳腺细胞上皮间充质转变(EMT)增强细胞的侵袭能力，但具体机制并 未详细探讨。这里，利用芯片技术，我们发现在乳腺癌细胞MCF7中自分泌的 人生长激素调节一系列的微小RNA(miRNA)的表达水平。其中，受生长激素 上调的miR．183．96．182簇介导了生长激素促进乳腺细胞上皮间充质转变的过 程。在体外和体内实验中，过表达miR．183．96．182簇显著增强上皮样的MCF．7 细胞的迁移能力，同时伴随有细胞骨架的重排以及EMT相关蛋白表达水平的改 变。进一步的研究证实miR．183．96．182簇是通过乳腺癌转移抑制蛋白1相似蛋 白基因(BI蝴SlL)调节细胞的EMT过程。同时，生长激素受体(GHR)受到 miR-96和miR．182的直接调节，证实了生长激素．miR．183．96．182簇之间的负 反馈调节机制。而且我们还发现受生长激素激活的信号转导及转录激活因子 STAT3和STAT5转录因子可以结合到miR．96．183．183簇启动子区激活 miR．183．96．182的转录。miR-183．96．182簇与BRMSlL的表达水平在乳腺癌病 人样本中与淋巴结转移指标相关。研究揭示了人生长激素通过miR-183．96．182 簇调节乳腺癌转移的具体分子机制。 第二部分：肿瘤组织的基因组研究可以为个体化的医疗方案以及治疗反应 提供丰富的参考信息，但对特定基因组突变背后的机制研究是整合基因组信息 和临床决策的关键。这里，我们报道人类三号染色体断臂上的MIRl35A1基因 在30％左右的乳腺癌病人中均存在拷贝丢失的现象，并且该类乳腺癌病人的预 后相比其他病人明显较差。同时，MIRl35A1基因的成熟产物，miR-135a的表 达水平也被发现在乳腺癌肿瘤组织中明显较良性组织低。在体内和体外实验中， 我们都证实了低的miR-135a表达水平与细胞的高恶性度以及转移潜力密切相 关。在肿瘤组织中，miR-135a的水平与雌激素受体alpha(ERa)呈明显的正相 关。进一步的研究证实MIRl35A1基因的启动子区存在ERa响应元件(ERE)， 在雌激素刺激下可以转录出更高水平的miR．135a。实验中还发现较低的 miR-135a水平可以削弱ERa阳性的细胞生长过程中对雌激素的依赖。在体外长 期对细胞使用抗雌激素治疗药物他莫昔芬(tamoxifen)引起miR．135a不可逆的 下调。在体内体外实验中我们都证实了miR．135a的下调是获得他莫昔芬抗性的 充分必要条件。对miR-135a的下游信号通路的研究显示，miR．135a不仅可以 通过靶点ERa(ESRl)，雌激素受体alpha相关蛋白A(ESRRA)和核受体辅 万方数据 摘要激活蛋白l(NCOAl)负反馈调节雌激素信号通路，而且抑制ERK和AKT信 摘要 激活蛋白l(NCOAl)负反馈调节雌激素信号通路，而且抑制ERK和AKT信 号通路上游基因PIM2，MRAS和LCPl的表达。这些研究揭示了miR．135a与 乳腺癌发生发展中扮演重要角色的信号网络ERa．ERK．AKT之间的平衡机制， 而MIRl35A1基因的缺失或者长期的抗雌激素治疗破坏了该平衡从而导致乳腺 癌的发展以及对他莫昔芬治疗的抗性产生。 关键词：乳腺癌生长激素微小核糖核酸183．96．182簇上皮间充质转化转移 微小核糖核酸135a拷贝丢失雌激素他莫昔芬抗性 II 万方数据 AbstractABSTRACT Abstract ABSTRACT Human growth horm