miR60在膀胱癌中的抑癌作用及其分子机制研究.docx

本论文在导师谢立平教授的研究团队中完成，研究团队所 本论文在导师谢立平教授的研究团队中完成，研究团队所 开展的研究受“国家临床重点专科’’、“浙江省中西医结合重点 学科(201 2．XK—A23)’’、“浙江省医学重点学科’’、“国家自然科 学基金(81 372773)’’、 “浙江省重大科技专项 (2014C14G2010003)”的资助，谨此致谢! 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 致谢 致谢 在此，我衷心感谢我的导师谢立平教授三年来在科研工作上对我的严格要求 和倾力支持。谢立平教授在我的科研课题的方向选择、实验设计、具体操作及学 术论文的撰写等各方面给予了我全面的指导和帮助，同时也为我创造了良好的科 研环境，使我的科研设想能够得以最终实现。谢立平教授在学习、生活和工作上 同样给予了我无微不至的关怀，帮助我迅速适应全新的科研环境，融入我们的科 研团队，使得我自身各方面的素质都得到了很大的提高；他的言传身教将使我受 益终身，他博大精深的学识、独到而敏锐的科研思路、科学严谨的治学态度和脚 踏实地的科学作风也将是我终生学习的榜样。 我也要感谢浙江大学医+学院附属第一医院多器官联合移植重点实验室的各位 老师和同学们，感谢他们在日常的科研工作中给予我的指导和帮助。 此外，我还要感谢的是浙江大学医学院附属第一医院泌尿外科的全体医护人 员们，正是他们在临床工作当中给予我的指导和帮助，让我的各项临床实验工作 得以顺利开展。在此，我也借此机会向他们致上一份诚挚的感谢。 我还要深深地感谢胡政麾、王潇、吴俭、朱意、徐鑫、徐向来、李诗琦、孟 帅、李江枫、汪松等同门师兄弟们，正是在他们的帮助下．我才能够克服科研和 学习上的各种困难，取得一定的科研成果。三年来的朝夕相处，也使我们结下了 深厚的情谊，这段美好的学习时光将会永远留在我的人生记·tz,中。 衷心感谢百忙中参加学位论文评阅和论文答辩的各位专家、教授。 最后，特别要感谢的是我的家人们，感谢他们在生活上对我的默默支持，让 我能够心无旁骛、专心致志地忙于学业，追求自己的人生理想。正因为有了他们， 我才得以完成博士生涯的全部学业、顺利毕业。 梁臻 2016年5月 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 miR．608在膀胱癌中的抑癌作用及其分子机制研究 浙江大学医学院外科学(泌尿外科) 博士研究生梁臻 导 师谢立平教授 中文摘要 背 景 膀胱癌是目前泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一。虽然局限性膀胱肿瘤能通过 外科手术切除而得以控制，但目前对于膀胱癌术后的高复发和高转移率临床仍然 缺少有效的控制手段。我们对膀胱癌的发病原因和进展机制所知甚少，除了常见 的流行病学和遗传学因素，许多错综复杂的分子事件是导致肿瘤细胞形成、进展 和转移均深层次原因。 miRNA是真核生物体内一种高度保守的，长度为20．24个核苷酸的非编码 RNA，其在人体组织器官内的表达分布具有明显的时空特异性，不同的组织细胞、 同一生物体的不同发育阶段呈现出不同的表达谱。miRNA参与了细胞生长、发育、 免疫应答、周期、凋亡、衰老、运动等多个生理过程。国内外研究者已在包括膀 胱癌在内的多种肿瘤内发现了异常的miRNA表达谱，肿瘤细胞内相较正常细胞呈 现差异化表达的miRNA，往往在肿瘤的发生发展中起到了关键作用，其中低表达 的miRNA在肿瘤细胞中多起到抑癌基因的作用。本研究希望在膀胱癌中寻找异常 表达miRNA，并进一步揭示其在肿瘤基因调控中的作用。 目 的 在收集到的膀胱癌患者手术切除标本中采取实时荧光定量PCR的方法检测 miR．608的表达水平，分析影响miRNA表达的表观遗传学机制。以获得性功能实 验观察miR-608对膀胱癌细胞系T24和UM．UC．3的一系列生物学功能的影响。以 II 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 生物信息学分析为基础，预测miR．608潜在的的调控靶点，通过对靶点基因的沉 默和过表达实验，验证miR．608对靶点调控的意义，并进一步探索调控中存在的 分子机制。 方 法 1．在13对膀胱癌组织标本中检测miR-608的相对表达量，‘对膀胱癌组织及与 其配对的正常膀胱粘膜上皮组织中的miR-608表达差异进行统计，并对不同病理 分期与分级的膀胱癌中miR-608表达水平的差异进行分析。 2．通过对T24和UM-UC．3膀胱癌细胞株体外转染miR-608