高表达RYBP基因对间充质干细胞增殖与凋亡的影响-内科学(血液病学)专业论文.docxVIP

广州医科大学高表达 广州医科大学 高表达 RYBP 基因对间充质干细胞增殖与凋亡的影响 万方数据 万方数据 高表达 RYBP 基因对间充质干细胞 增殖与凋亡的影响 研究生：周家砚 导 师：王顺清 主任医师 专 业：内科学（血液病学） 广州医科大学附属广州市第一人民医院血液内科 中文摘要 RYBP 与细胞凋亡关系密切，已有的研究发现 RYBP 高表达可以诱导实体瘤 细胞系的凋亡，沉默 HL60 细胞系的 RYBP 则降低 HL60 细胞系的凋亡，但关于 RYBP 对正常细胞增值和凋亡的影响则研究偏少。本实验的研究目的就是在间充 质干细胞中高表达 RYBP 后研究 RYBP 对增值和凋亡的影响，也进一步探讨 RYBP 在正常细胞中的作用。这也指导我们在未来是否可以将 RYBP 作为部分肿 瘤的特异性治疗靶点提供依据。 研究方法 1. 高表达 RYBP 间充质干细胞的构建 1）利用携带 RYBP 基因的穿梭质粒通过 LR 反应构建慢病毒表达载体。 2）将构建好的慢病毒表达载体与第三代慢病毒包装系统 SL3、SL4、SL5 通 过 Lipofectamine 2000 及 Opti-MEM 转移至 293FT 细胞中包装病毒并转染间充质 干细胞，通过 GFP 荧光观察转染效率。 3）嘌林霉素筛选获得稳定转染 RYBP 的间充质干细胞。 4）对稳定转染的间充质干细胞进行 western 和 real-time PCR 验证。 3 2. 测定凋亡和增殖 结果 1、 成功构建携带 RYBP 基因的慢病毒表达载体，并通过 PCR 验证和测序检 测正确。 2、 成功包装病毒，并成功转染间充质干细胞，嘌林霉素筛选后获得稳定转 染 RYBP 的间充质干细胞。 3、 Western 和 real-time PCR 验证证实 RYBP 成功转染间充质干细胞。 4、 发现高表达 RYBP 对间充质干细胞的凋亡并无影响。 结论 1、高表达 RYBP 对对间充质干细胞的凋亡并无影响，这说明 RYBP 在某些 肿瘤细胞和部分正常细胞中对凋亡的影响存在差异，这也揭示部分正常细胞具有 自主执行凋亡的能力。 2、这种 RYBP 对凋亡影响的差异性在临床是很有意义的，这也给我们在未 来将 RYBP 作为部分肿瘤的特异性治疗靶点提供理论依据。 关键词：RYBP；间充质干细胞；细胞凋亡 4 Effects of the overexpressed RYBP gene on the proliferation and apoptosis of mesenchymal stem cells Postgraduate:Zhou Jia-yan Supervisor:Wang Shun-qing Major:Internal medicine(Hematology) Department of Hematology,Guangzhou First Municiple People’s Hospotial Affiliated to Guangzhou Medical College Abstract RYBP is related with apoptosis and it has been found that high expression of RYBP can induce the apoptosis of tumor cell lines. It has been established that the apoptosis of a HL60 Cell Line with Stable RYBP Silencing is decreased, while the effect of RYBP on proliferation and apoptosis in some normal cells is less investigated. The aim of the present study is to investigate the influence of RYBP on the proliferation and apoptosis in mesenchymal stem cells, at the same time, we also want to further explore the role of RYBP in normal cells. This study will give us important information on whether RYBP can be used as the tumor specific therapeutic targets in the future scientific research. Resea