凝结芽孢杆菌.pptxVIP

一、凝结芽孢杆菌;1、分类地位;5、菌株在YPD 培养基上生长良好, 48 h 形成直径2~3 mm 大小的圆形菌落, 白色而有光泽, 表面湿润、平坦, 边缘整齐。油镜观察, 菌体形态为杆状, 单个、成对或链状排列, 芽胞端生。;6、凝结芽孢杆菌经90℃，60min 湿热处理和120℃，60min 干热处理，其活菌数只下降了一个数量级；将其置于pH 值大于2.42 的酸性溶液中，存放一年后，其存活率仍高达105；凝结芽孢杆菌在1%～7% NaCl 溶液中均可存活4 周以上，其在8% NaCl 溶液中能存活一个月。但凝结芽孢杆菌在低pH 值条件下，其抗逆性会下降。例如在酸性条件下(pH4.0)，凝结芽孢杆菌孢子对热几乎没有耐受性，而且生长受到抑制。此外，Cerrutti 等也发现在pH 值小于4.5 和水活度0.96 条件下，凝结芽孢杆菌的生长受到抑制。;2、用途意义;3、培养基;2、凝结芽孢杆菌增殖培养基(YPD 培养基) : 葡萄糖20 g、胰蛋白胨20 g、酵母粉10 g、水1 000 ml, 调pH值7.0, 115 ℃灭菌20 min。 3、固体培养基: 在液体培养基的基础上添加1.5%的琼脂。 4、种子培养基(W/ V) : 蛋白胨10 g/L, 酵母浸出物5 g/ L, 氯化钠10 g/ L, 固体培养基再加琼脂15 g/ L, 自然pH。 5、基础发酵培养基(W/ V) : 蔗糖10 g/L, 蛋白胨10 g/ L, 磷酸氢二钠2 g/ L, 磷酸二氢钠2 g/ L,pH 7. 0。;4、培养条件;2、接斜面：将分离的菌种转接到种子斜面培养基, 40 ℃培养24 h, 备用。 3、种子液的制备：取一环活化的菌种, 接入装液量为50 mL YPD液体培养基的250 mL 三角瓶中, 40 ℃, 180 r/min,培养18 h。 4、摇瓶培养：分别取1 mL( 接种量为2% , V/ V) 种子液,接入盛有50 mL 培养基的250 mL 三角瓶中。置摇床中, 30 ℃ 振荡培养12 h, 转速为160 r/ min。;实验条件优化;6、《益生凝结芽孢杆菌AHU1366 的液体深层发酵培养》 发酵培养基的组成为：麸皮4 %、豆粕粉1. 5 %、NaCl 0. 5%、K2HPO4 4%、MnSO4 30.8mg/ L, pH 7. 2~ 7. 4。 最佳发酵条件为：250 mL 三角瓶中装液体积为15 mL, 接种量4 % , 37 ℃, 180 r/ min, 摇瓶培养56 h,在优化后的培养条件下, 生物量OD600达到19. 68, 芽孢形成率为80 % 。;5、技术关键;4、凝结芽孢杆菌在培养过程中会产乳酸，使得菌液的pH值降低，所以要求发酵液的初始pH值不能太低，但如果pH值太高，又不利于菌的生长，得不到较多的芽孢，所以本???验设计的初始pH值为6.5~7.5。 5、芽胞形成率依赖于细胞密度，在菌体浓度达到1010cfu/mL的过滤培养中，芽胞形成率上升至60%。在摇瓶条件下，添加由相同菌株发酵液制备而来的条件培养基可以促进芽胞的形成，芽胞形成率为62.5%以上， ;6、碳源是影响芽孢形成的重要因素，高浓度碳源会抑制芽孢的形成。 7、无机盐在调控芽孢形成中发挥重要作用。Mn2+ 对芽孢的形成起到显著作用，当浓度在0.005%～0.1% 范围内，对芽孢的形成有促进作用，当浓度大于0.10% 时，对菌体生长有抑制作用。PO4 3-也有利于芽孢的形成，而K+ 和Na+ 对凝结芽孢杆菌芽孢的形成无明显促进作用，无机盐的作用遵循“适量促进、过量抑制”的原则。 8、王进华等研究发现高温对芽胞的形成有明显影响。50℃条件下芽胞的形成率可以达到57.7%，而且减少通气量有助于芽胞的形成。 9、王天云等则在培养细胞后期加入固体介质可以促进芽孢的形成，例如木屑、碎布屑和玉米芯。而且芽孢形成率达9 5% 以上，通常在添加后静置培养48h 后芽孢就可以形成。