溶藻弧菌kdpD基因敲除突变株的构建及其表型特征.PDFVIP

微生物学通报 Sep. 20, 2015, 42(9): 1770−1778 Microbiology China © 2015 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.140942 研究报告 溶藻弧菌kdpD 基因敲除突变株的构建及其表型特征 张燕飞1,2,3 庞欢瑛1,2,3 简纪常1,2,3 鲁义善1,2,3 吴灶和2,3,4* (1. 广东海洋大学 水产学院 广东 湛江 524088) (2. 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 广东 湛江 524088) (3. 广东省水产经济动物病害控制重点实验室 广东 湛江 524088) (4. 仲恺农业工程学院 广东 广州 510225) 摘 要：【目的】探究kdpD 基因对溶藻弧菌生物学特性的影响。【方法】采用Overlap PCR 和同 源重组技术，结合正负向筛选，构建kdpD 基因无标记基因框内敲除突变株，比较kdpD 突变株 和野生株HY9901 在生长速率、胞外蛋白酶活性以及毒力等方面的差异。【结果】成功构建溶藻 弧菌 kdpD 基因敲除突变株。体外实验表明，kdpD 的缺失对溶藻弧菌的生长曲线和胞外蛋白酶 活性的影响不明显，但是突变株的泳动能力和生物被膜形成能力出现下降。斑马鱼致病性试验结 果显示，突变株毒力下降了 8.84 倍。【结论】kdpD 基因参与调控溶藻弧菌的泳动能力、被膜形 成和毒力，但不影响生长速率和胞外蛋白酶活性。 关键词：溶藻弧菌，kdpD ，基因敲除，表型 Construction and characterization of the kdpD gene knock-out mutant of Vibrio alginolyticus ZHANG Yan-Fei1,2,3 PANG Huan-Ying1,2,3 JIAN Ji-Chang1,2,3 LU Yi-Shan1,2,3 WU Zao-He2,3,4* (1. Fisheries College, Guangdong Ocean University, Zhanjiang, Guangdong 524088, China) (2. Guangdong Provincial Key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals , Zhanjiang, Guangdong 524088, China) (3. Guangdong Key Laboratory of Controlfor Disease of Aquatic Animals , Zhanjiang, Guangdong 524088, China) (4. Zhongkai University of Agriculture and Engineering, Guangzhou, Guangdong 510225, China) Abstract: [Objective] To investigate the role of kdpD gene in Vibrio al