GB/T 18649-2002牛传染性胸膜肺炎(牛肺疫)诊断技术.pdf

GB/r18649-2002 前 言 牛肺疫是由丝状支原体丝状亚种(PG1)引起的一种牛属动物的传染病。健康牛和病牛接触由呼吸 道吸人病牛的“飞沫”，是本病的主要传染方式和感染途径。暴发流行时多呈急性病演，呼吸系统症状非 常明显，体温在41C以上稽留。但在病的常在地区多见亚急性和慢性病程，以地方流行性为特点。急性 期病变为浆液渗出性纤维素性胸膜肺炎，肺间质多孔多汁，肺小叶出现各期肝变、多色，呈大理石样肺， 肺胸膜和肋胸膜粘连，以及胸腔渗出液大量储留为特征。转为慢性后逐渐形成肺包膜或坏死块。慢性病 牛长期带菌，成为隐蔽的传染源。 在新发的地区对此病的检验应采取流行病学、临床学、血清学、病理学和病原学综合诊断方法为宜。 世界动物卫生组织[WorldOrganizationforAnimalHealth(英),OfficeIntentionaldesEpizootic(法)， OIE〕于1986年和1992年推荐采用稍加改进的Campbell和Turner的补体结合试验作为牛肺疫血清 学诊断的方法，但常出现非特异性反应。新中国成立后一直采用补体结合试验检验牛肺疫，并于1979年 将该法列人农业部颁布的动《物检疫操作规程》中，但这种方法常出现1%-2%非特异性反应。近年来 我国研制成功了特异性高的微量凝集反应检验方法，它不但降低了非特异性反应率，而且操作简便，容 易判定，应用效果良好。病原学诊断主要取病牛肺脏，胸腔渗出液和肺门淋巴结接种马丁培养基，即可分 离出牛肺疫病原体，此法对急性期病例的检出率可达100%. 本标准的附录A、附录B、附录C、附录D,附录E都是标准的附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。 本标准主要起草人:白文彬。 中华人 民共 和 国 国家标 准 GB/T 18649-2002 牛传染性胸膜肺炎(牛肺疫)诊断技术 Diagnostictechniquesforcontagiousbovinepleuropneumonia ， 范围 本标准规定了牛传染性胸膜肺炎的病原学检查、补体结合试验、微量凝集试验诊断技术要求。 本标准适用于牛传染性胸膜肺炎的检验。病原学检查适用于急性、亚急性及慢性病牛分离病原体， 补体结合试验和微量凝集试验适用于牛肺疫抗体的检测。 2 病原学检查 2.1 材料准备 培养基:10%马血清马丁肉汤，10写马血清马丁琼脂 见〔附录A(标准的附录)」。 2.2 病料采集 2.2.1 用灭菌器械(剪刀、镊子、吸管、青霉素瓶等)无菌采集肺脏、胸腔渗出液、肺门淋巴结，并将肺病 料剪成3cm-5em方块。胸部淋巴结，以整个淋巴结为好，胸腔渗出液用吸管吸人青霉素瓶内。 2.2.2 受检病料的保存:肺和淋巴结保存在用茶色广口瓶盛装的灭菌的40% 50%甘油生理盐水中， 胸腔渗出液不加任何保存液。病料均放人冰箱内保存，并应尽快送往实验室检验。 2.3 培养方法 在无菌条件下剪肺病料或淋巴结小块，用铂金耳钓人10%马血清马丁肉汤内;胸腔渗出液用灭菌 吸管吸取。1ml一。.3mL接种于马丁肉汤中即可。同时取剪碎病料小块或直接取胸腔渗出液，用铂金 耳在10%马血清马丁琼脂培养皿上划线接种，培养皿用胶布封口，置37C-38C培养，每天观察一次， 5d-7d后判定。 2.4 结果判定 2.4.1 培养特征 2.4.1门 培养性状和菌落形态:牛肺疫病原微生物在10%马血清马丁肉汤内生长初期呈轻微混浊或 呈白色点状、丝状生长，以后逐渐均匀混浊，半透明稍带乳光，不产生菌膜或沉淀，也无颗粒悬浮。在 10%马血清马丁琼脂培养皿上生长迟缓，为极小的水滴状圆形略带灰色的微细菌落，中央有乳头状突 起。菌落直径约0.2mm-0.5mm，小的不易看见，需用放大镜或低倍显微镜观察。 2.4-1.2 染色镜检取马丁肉汤培养物涂片放温箱中干燥，后在酒精灯上轻微火焰固定，再用3写-50o 铬酸蒸馏水溶液固定1min-2min，水洗，浸人用蒸馏水稀释的1，30的姬姆萨氏染液中染色，染片时 染色缸放人普通冰箱内过夜，染色后取出用蒸馏水轻洗，自然干燥后用800-1000倍显微镜观察。菌形 为多形态，以球点形最常见，大小在125nm