2010年版中国药典卫生学检验培训201年版《中国药典》微生物检查法.pptVIP

二、培养基适用性实验的实施与操作 1.计数培养基的适用性检查 （一）应用范围;细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查，包括成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应检查。 （二）菌种及菌液制备 验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。 大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B） 44 102〕 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（B） 26 003〕 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B） 63 501〕 白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F） 98 001〕 黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F） 98 003〕 菌液制备同微生物限度检查方法学验证 二、培养基适用性实验的实施与操作 （三）操作 营养琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 用相应的对照培养基同法操作 对照培养基：由中检所研制并分发 （四)结果判定 被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落大小形态一致 二、培养基适用性实验的实施与操作 2、控制菌检查用培养基适用性检查 控制菌检查用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应检查。检查项目包括培养基的促生长、指示和抑制特性能力。 菌种 对试验菌种的要求同计数培养基的适用性检查。 大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B） 44 102〕 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（B） 26 003〕 乙型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi B）〔CMCC（B） 50 094〕 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC（B） 10 104〕 生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B） 64 941〕 白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F） 98 001〕 二、培养基适用性实验的实施与操作 增菌培养基促生长能力检查：分别接种不大于100cfu的试验菌（见表2）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。 固体培养基促生长能力检查：取试验菌各0.1ml（50～100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板中，每种培养基平行制备2个平皿，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养，计数。被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比应不小于70%，且生长的菌落形态应一致。 培养基抑制能力检查：划线接种试验菌（见表2）于被检培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度和时间下培养，试验菌应不得生长。 培养基指示能力检查：分别接种少量试验菌（见表2）于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度和时间下培养。被检培养基中试验菌生长的菌落形态、大小、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。 三、白色念珠菌的检查 取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2）直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的沙氏葡萄糖肉汤培养基中，培养24～48 小时。取上述培养物划线接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上，培养24～48小时（必要时延长至72小时）。 白色念珠菌在沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的菌落呈乳白色偶见淡黄色，表面光滑有浓酵母气味，培养时间稍久则菌落增大，颜色变深、质地变硬或有皱摺。若平板上无菌落生长或生长的菌落与上述菌落形态特征不符，判供试品未检出白色念珠菌。如平板上生长的菌落与上述菌落形态特征相符或疑似，应挑选2～3个菌落分别接种至念珠菌显色培养基平板上，培养24～48小时（必要时延长至72小时）。若平板上无绿色或翠绿色的菌落生长，判供试品未检出白色念珠菌。 若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色，挑取相符或疑似的菌落接种于1%吐温80玉米琼脂培养基上，培养24～48小时。取培养物进行染色，镜检及芽管试验。 芽管试验　挑取1%吐温80玉米琼脂培养基上的培养物，接种于加有一滴血清的载玻片上，盖上盖玻片，置湿润的平皿内，置35～37℃、1～3h，置显微镜下观察，可见到由孢子长出短小芽管。 若上述疑似菌为非革兰阳性菌，显微镜未见厚膜孢子、假菌丝、芽管，判供试品未检出白色念珠菌。 四、微生物限度检查方法验证试验 怎么验证 1.验证思路 （1）选择敏感菌株 间接方法——文献、技术资料（可靠） 直接方法——预实验