- 94
- 0
- 约9千字
- 约 8页
- 2018-12-18 发布于四川
-
正版发售
- 被代替
- 已被新标准代替,建议下载标准 GB/T 18648-2020
- | 2002-02-19 颁布
- | 2002-05-01 实施
- 1、本标准文档共8页,仅提供部分内容试读。
- 2、本网站所提供的标准文本仅供个人学习、研究之用,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或网络传播等,侵权必究。
- 3、本网站所提供的标准均为PDF格式电子版文本(可阅读打印),因数字商品的特殊性,一经售出,不提供退换货服务。
- 4、标准文档要求电子版与印刷版保持一致,所以下载的文档中可能包含空白页,非文档质量问题
查看更多
GB/T 18648-2002
前 言
非洲猪瘟(Africanswinefever,简称ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的一种急性、热性、
高度接触传染性疾病 其特征为病程短,病死率高,临床症状和病理变化均类似于急性猪瘟,表现高热、
皮肤充血、流产、水肿及脏器出血。为世界动物卫生组织[WorldOrganizationforAnimalHealth(英),
OfficeIntentionaldesEpizootic(法),OIE]和我国规定的动物一类疾病。病毒在鲜肉和腌肉中能存活数
月。
ASF的实验室诊断分为两类:第一类包括病毒分离、病毒抗原和基因组DNA的检测;第二类包括
抗体的检测。试验方法的选择主要依据本国或本地区的疾病情况而定。在没有ASF但又怀疑该病存在
的国家,实验室诊断必须应用无感染性的诊断方法,即应用聚合酶链反应(PCR)检测病毒基因组DNA
和应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗体
我国是无ASF国家,目前尚无ASF的检疫方法。农业部动物检疫所于199?年与美国梅岛动物病
研究中心进行了ASF的无感染性快速检测方法的合作研究,建立了适合于我国使用的由可疑感染动物
血液和内脏器官中直接检测ASFVDNA的PCR技术,以及检测血清中ASFV抗体的ELISA方法。本
标准对这两种方法技术要求作了规定
本标准的附录A、附录B和附录C都是标准的附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:农业部动物检疫所。
本标准主要起草人:蒋正军、王树双、尹燕博、蔡丽娟、郭福生、陆明哲、孙淑芳、龚振华。
中华人 民共和 国国家标准
GB/'r 18648-2002
非洲猪瘟诊断技术
DiagnostictechniquesforAfricanswinefever
范围
本标准规定了非洲猪瘟(ASF)聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)的技术要求。
本标准适用于生猪和野猪等易感动物及其产品ASF的诊断和检疫。
2 PCR试验
2.1 材料准备
2.1.1样品DNA制备方法见附录A(标准的附录)。
2.1.2 电泳液缓冲液的配制方法见附录B(标准的附录)。
2.1.3 标准ASFV-BA株DNA、引物1、引物2,1.25mmol/LdN丁P和载样缓冲液。
2.1.4 台克(Taq)DNA聚合酶、分子量为100碱基对(bp)Ladder(标准DNAMarker)0和10倍浓度
的聚合酶链反应(PCR)扩增缓冲液。
2.1.5 自动DNA热循环仪。
2.2 操作方法
2.2.1将下列试剂按要求量加人到0.75mL的离心管中:灭菌蒸馏水(24.5风);10倍浓度的PCR扩
增缓冲液(5VL);1.25mmol/LdNTP贮存液(8pL);引物 1(1pL);引物2(1pL);样品DNA溶液
(10JAI)(见附录A);TaqDNA聚合酶(。.5PI)。
2.2.2 设定两个对照,阳性对照为标准的ASFV-BA,株的10pLDNA含量为10fg;阴性对照为不含
DNA的灭菌蒸馏水 10讨 。
2.2.3 取50pl矿物油覆盖在混合液上。
2.2.4 将加有样品或对照混合物的Eppendorf管放人自动DNA热环仪中,按下述程序和条件进行
DNA扩增 94C5min,50一C2min,72C3min循环一次;94C1min,50'C'2min,72C3min循环30次;
94C1min,50"C2min,72'C10min循环一次,最后置于4'C保存。
2.2.5 上述步骤完成后,从矿物油下小心取出每种反应混合物20pL,放人另一支干净的Eppendorf
管中并加2pL载样缓冲液。
2.2.6 将所有样品按编号加人到对应2%琼脂凝胶(见附录B1)板的各孔中,其中一孔加标准阳性
DNA样品。在凝胶的边孔中加人标准分子量DNAMarker,
2.2.7 将凝胶在150v恒定电压下电泳2ha
2.2.8 结果判定:用紫外光源检查凝胶。如为阳性样品,则出现一条孤立的、与阳性对照PCR产物的同
步迁移的带,分子量为265bp,阴性对照和非ASF感染猪无265by带。
3 酶联免疫吸附试
您可能关注的文档
- 《GBT120.1-2000-内螺纹圆柱销不淬硬钢和奥氏体不锈钢》.pdf
- 《GBT126 43-1997-工业机器人词汇》.pdf
- 《GBT126 49-1990-气象雷达参数测试方法》.pdf
- 《GBT136 46-1992-橡胶中结合苯乙烯含量的测定分光光度法》.pdf
- 《GBT145-2001-中心孔》.pdf
- 《GBT146 40-1993-工业循环冷却水中钾含量的测定原子吸收光谱法》.pdf
- 《GBT146 43.1-1993-工业循环冷却水中粘液形成菌的测定平皿计数法》.pdf
- 《GBT146 43.3-1993-工业循环冷却水中粘泥真菌的测定平皿计数法》.pdf
- 《GBT146 43.4-1993-工业循环冷却水中土壤真菌的测定平皿计数法》.pdf
- 《GBT146 43.5-1993-工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定MPN法》.pdf
文档评论(0)