第二章基因工都程的酶学基础.pptVIP

概括起来，诱发星活性的因素有如下几种： （1）高甘油含量（5％, v／v）； （2）限制性内切核酸酶用量过高（100U／ugDNA）； （3）低离子浓度（25 mmol／L）； （4）高pH（8.0以上）； （5）含有机溶剂，如DMSO（二甲基亚砜 ），乙醇等； （6）有非Mg2+的二价阳离子存在（如Mn2+，Cu2+，Co2+，Zn2+等）。 但在实际应用中，一般要用稍过量的酶（1μg加2~5U酶）反应较长的时间，才能达到完全酶解。但是不能过分加大酶的用量 酶过量对酶切反应的影响： 1）酶过量（一般为?100U/μgDNA）会影响识别序列的正确性，如：BamHI 的正常识别序列: GGATTC ；酶过量识别序列 NGATCN 2）酶制剂含甘油成分，酶过量，会因为甘油量大而影响其识别的专一性，诱发星号活力。 6. 酶对消化效率的影响 1U核酸内切酶的酶活性：在最佳反应条件下1h，完全水解1μgDNA所需的酶量 1、限制-修饰系统 2、限制性核酸内切酶的命名和类型 3、II型限制性核酸内切酶的基本特性 4、影响限制性内切酶活性的因素 5、限制性内切酶对DNA的消化作用 第一节 限制性核酸内切酶 限制性内切酶对DNA的消化 1. 内切酶与识别序列的结合模式 1986年J.A. McClarin等通过X射线晶体衍射发现II型限制性内切酶是以同型二聚体的形式与