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第三篇基因信息的传递 Biochemistry Department Department of Basic Medical Sciences Hangzhou Normal University Guyisheng 第十章 （ DNA Biosynthesis，Replication ) 第一节 复制的基本规律 (Basic Rules of DNA Replication) 复制的方式——半保留复制 (semi-conservative replication) 复制的高保真性(high fidelity) 双向复制(bidirectional replication) 半不连续复制(semi-discontinuous replication) 一、半保留复制(semiconservative replication) （一）概念 （二）实验依据：密度梯度实验 （三）生物学意义： 1.保证遗传信息传递的忠实性 2.遗传和变异的统一 半保留复制的意义 DNA的半保留复制保证了DNA在代谢上的稳定性，经过许多代的复制，DNA多核苷酸链仍可保持完整，存在于后代而不被分解，这种稳定性体现了DNA遗传过程的相对保守性。 遗传的保守性是相对的，而不是绝对的。自然界还 存在着普遍的变异现象。 二、双向复制(bidirectional replication) 原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 原核生物DNA的双向复制 真核生物DNA的双向复制 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 真核生物的多复制子形式 三、半不连续复制(semi-discontinuous replication) 顺着解链方向生成的子链，复制是连续进行的，这股链称为领头链。 另一股链因为复制的方向与解链方向相反，不能顺着解链方向连续延长，这股不连续复制的链称为随从链。复制中的不连续片段称为岡崎片段(okazaki fragment)。 领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性。 半不连续复制图解 四、需要RNA引物(primer) DNA聚合酶不能直接聚合游离的dNTP，必须由一段核酸片段提供3’OH末端。 由引物酶催化，由NTP为原料，合成RNA引物。 第二节 DNA复制的酶学 （The Enzymology of DNA Replication） 复制是在酶催化下的核苷酸聚合过程，需要多种物质参与： 底物：dNTP：dATP、dGTP、dCTP、dTTP 聚合酶：依赖DNA的DNA聚合酶 模板：解开成单链的DNA母链 引物：RNA，提供3’-OH末端，使dNTP可以依次聚合 其他酶和蛋白因子：解螺旋酶、拓朴异构酶、引物酶、DNA连接酶、单链结合蛋白等 一、复制的化学反应（形成磷酸二酯键） 新链的延长只可沿5? → 3?方向进行 四、复制中的解链及DNA 分子拓扑学变化 与DNA解旋和解链有关的酶和蛋白质： 解螺旋酶（helicase）等 DNA拓扑异构酶（DNA topoisomerase） 单链DNA结合蛋白（single stranded DNA binding protein，SSB） 引物酶（primase） 作用机制： 连接酶的功能 DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用。 在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。 也是基因工程的重要工具酶之一。 DNA聚合酶，拓扑酶和连接酶催化3?,5?-磷酸二酯键生成的比较 DNA解链 引发体和引物 含有解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶和DNA复制起始区域的复合结构称为引发体。 引物生成 引物是由引物酶催化合成的短链RNA分子。 领头链的合成 随从链的合成 全图 复制中的不连续片段需连接成连续的子链 先由RNA酶水解引物。 引物留下的空隙由DNA聚合酶I催化dNTP逐一自5′向3′端聚合而填补。 最后，两不连续片段相邻的5′-P和3′-OH还有一个缺口，则由DNA连接酶加以连接。 随从链不连续性片段的连接图示 二、真核生物的DNA生物合成 特点： DNA的复制只发生在S期 多复制子 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动 真核细胞含有5种DNA聚合酶 端粒复制 DNA合成期 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 （一）复制 的起始 复制的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和po