免疫组化4--双重或多都重标记.pptVIP

* 双重或多重免疫组化标记 一、基本原理 双重或多重标记是利用免疫学和细胞化学原理，在同一张切片上原位示踪组织或细胞内不同抗原大分子物质的一项标记染色技术。 示踪剂：---荧光素 ---酶 ---胶体金等 操作的原则和要求基本上与单标免疫组化方法雷同优点：不同抗原成分位置、功能关系更直观缺点：流程长 脱片机率更高 前后重染色试剂间有交叉干扰 二、技术类型 （一）双重或多重免疫荧光标记染色 采用呈现不同颜色的荧光色素配伍，分别标记不同的抗体，再通过各自与同一切片上的相应抗原特异性结合而加以区别显示所建立起来的双重或多重免疫组化染色技术。 优点：方法敏感、特异 缺点： 需选用各自特定的激发滤光片分别观察或二次曝光显影 样本不能长期保存 组织结构背景不清晰。 直接法---特异、快速 间接法---敏感、多用 技术类型 抗体试剂 异种动物抗体---常混合应用，操作步骤少，脱片率相对较低 同种动物抗体---分别应用，操作步骤加倍，脱片机率较高；前后重免疫荧光标记交叉重叠机会多，需用酸性洗脱或多聚甲醛蒸气处理 操作举例：垂体腺瘤----ACTH与GH双重免疫荧光标记染色（间接法） (1)石蜡切片，脱蜡，梯度酒精水化，入PBS。 (2)1％人血清白蛋白