第十三上部分肝功能检验.pptVIP

卡门氏单位：1.0ml血清在25℃，340nm，反应体积3.0ml,光径1.0cm时每分钟测定吸光度下降0.001，即消耗4.82 ? 10-4μmol NADH为一个卡门氏单位 【参考范围】 5～25卡门氏单位 【临床意义】 (2) 慢性活动性肝炎或脂肪肝： (1) 肝细胞损伤的灵敏指标: ALT轻度增高(100～200IU),或属正常范围, 2. 连续监测法测定ALT （１）原理：　 　 　 采用酶偶联反应,即L-丙氨酸和α-酮戊二酸在ALT作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸再在LD作用下生成L-乳酸，同时NADH被氧化为NAD+,可在340nm处连续监测到NADH的消耗量,从而计算出ALT活性浓度。 　　双试剂法 :首先使血清与缺少α-酮戊二酸的底物溶液混合，37℃保温5分钟，将标本中所含的α-酮酸(如丙酮酸)消耗完，然后，加入α-酮戊二酸启动ALT催化的反应，在波长340nm处连续监测吸光度下降速率。根据线性反应期吸光度下降速率(-△A/min)，来计算ALT的活性。 （２） 方法评价： ①存在着两个副反应，会使测定结果偏高； A、血清中存在的α-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH。 B、血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)增高时，在有氨存在条件下，亦能消耗NADH。 ②双试剂法，因温育期长，能有效地消除干扰反应，测定准确性 高，是ALT测定的首选方法； ③血清不宜反复冰冻保存，以免影响酶活性；避免使用溶血标本。 3.赖氏法测定AST （１）原理：　 　 　　血清中的AST可催化门冬氨酸(aspartate)与α-酮戊二酸间的氨基移换，生成 草酸乙酸(oxaloacetate)和L-谷氨酸。草酸乙酸自行脱羧转变成为丙酮酸。反应60 分钟后，加入2，4-二硝基苯肼终止反应，并与酮酸生反应生成两种2，4-二硝基苯 腙。在碱性条件下,两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在505nm处差异最大，由草 酸乙酸转变成的丙酮酸所生成的苯腙呈色强度显著大于α-酮戊二酸苯腙。据此可 用比色法测定AST活性。 （２）方法评价： ①赖氏法的实验结果需与卡门分光法的结果对比后求出； ②该法的重复性差：负干扰现象 【参考范围】 8～28卡门氏单位 【临床意义】 肌炎、胸膜炎、肾炎及肺炎：血清AST也可轻度增高。 心肌梗死：血清中AST活性增高 各种肝病病人：血清AST的升高 4．连续监测法测定AST （１）原理：　 　　　采用酶偶联反应,即L-门冬氨酸和α-酮戊二酸在AST作用下，生成草酰乙酸和L-谷氨酸。草酰乙酸在苹果酸脱氢酶作用下生成L-苹果酸，同时伴有NADH转化为NAD+，在340nm监测NADH的转化速率，从而计算出AST的活性。 　 　双试剂法 :同ＡＬＴ测定。 （２）方法评价 误差可来自内源性和(或)外源性 内源性干扰主要来自血清中高浓度丙酮酸和L-谷氨酸脱氢酶(GLDH)。 外源性干扰来自试剂中污染的GLDH和AST。 【参考范围】 5～40 IU/L(连续监测法测定)　　 【临床意义】 见赖氏法 (二)ALP测定 化学法 连续监测法： 鲍氏法 金氏法 皮氏法 １、金氏法测定ALP （１）原理： 　　ALP在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使之水解释放出酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4－氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化合物，根据红色深浅确定ALP的活力。 (2) 方法评价： 　磷酸苯二钠比色法与更早的β-甘油磷酸钠法相比具有较大的优点，如水解速度快，保温时间较短、灵敏度较高、显色稳定、不需去蛋白、操作简单、快速。但与磷酸对硝基酚连续监测法相比，准确度、精密度较低；操作比较繁琐,，灵敏度低。 【参考范围】 成人：3～13 单位 ，儿童：5～28单位 　　ALP金氏单位定义是100ml血清，37℃与底物保温15分钟，产生 1mg酚为1个金氏单位。 ALP主要用于诊断肝胆和骨骼疾病 【临床意义】 2.连续监测法测定ALP （１）原理： 　　以磷酸对硝基酚(p-nitrophenyl phosphate,4-NPP)为底物，2-氨基-2-甲基-1,3-丙醇（2-amino-2-methyl-1-propanol,AMP）或二乙醇胺为磷酸基的受体。在碱性环境下，ALP催化4-NPP水解产生游离的对硝基酚，对硝基酚(p-nitrophenol，4-NP)在碱性溶液中转变成黄色。根据405nm处吸光度增高速率来计算ALP活性单位。 （１）方法评价： 线性范围可达500U/L，批内CV为2.06%～2.36%，批间CV为2.74%。 * * * * 第十三章 肝功能检验 本章内容概要： 本章教学要求： 第二节 肝功能试验 第一节 概述 掌