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真菌感染的非培养诊断进展 北京大学第一医院皮肤科 北京大学真菌和真菌病研究中心 李若瑜 ryli0660@bjmu.edu.cn 2008年2月27日 真菌感染的流行现状 条件致病菌 念珠菌血行感染发病率和死亡率高 Aspergillus Cryptococcus 曲霉感染: 日益严重的问题 曲霉是继念珠菌之后的第二常见真菌病原体 虽然经过治疗，免疫抑制患者的死亡率仍达90% 美国血源性念珠菌感染种类分布 (1998-2000) 我国念珠菌种类的变化 菌种 85-92 % 96-2002% 白念珠菌 80-90 43-75 热带念珠菌 10-13 10-15 光滑念珠菌 1-6 14-21 克柔念珠菌 1 5-27 葡萄牙念珠菌 1 2-5 新型隐球菌 1 1-5 临床常见的条件性真菌感染 念珠菌病:最常见，占血源感染的第4位。 曲霉菌病:常见于血液系统恶性肿瘤病人，器官移植常见合并症。 隐球菌病: 在艾滋病人发病率为10-20%。 接合菌病（毛霉病）: 多见于重症糖尿病和烧伤病人。 临床有增多趋势的条件性真菌 非白念念珠菌感染 毛孢子菌感染 地霉感染 镰刀菌感染 枝顶孢霉感染 暗色真菌感染 马尔尼菲青霉 非培养诊断检测方法 G试验检测b-1,3 –D-葡聚糖 ELISA法检测曲霉半乳甘露聚糖抗原 乳胶凝集试验检测新生隐球菌抗原 ELISA法检测念珠菌抗原 PCR_真菌通用引物、种属特异性引物 β 1,3-D-glucan （葡聚糖） 真菌细胞壁成份，占50%以上 其他微生物、动物及人的细胞不含该成份 主要用于念珠菌和曲霉菌感染诊断 方法：G试验 β-葡聚糖可特异性激活鲎（Limulus）变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。 - b-1,3-D-葡聚糖通过激活G因子（ Factor G）引起凝集； 内毒素通过激活C因子（Factor C）引起凝集； 试剂盒: 祛除Factor C ?葡聚糖特异 β -1,3-D-葡聚糖检测方法 两种试剂盒 Fungitec-G (marketed in Japan) Obayashi, Lancet 345:17-20, ’95 “确诊真菌感染的患者”: 90% sensitive Glucatell (approaching US licensure) Ostrosky 多中心研究 189 侵袭性真菌感染高危的患者* 每名患者取材1次: Sensitivity: 70%; Specificity 87%. 界值：Fungitec:20 pg/mL Fungitell:60/80 pg/mL 金山川公司G试剂:50 pg/mL β-1,3-D-葡聚糖 检测范围 不仅可检测念珠菌感染 曲霉、镰刀菌 和很多霉菌均存在β-1,3葡聚糖( Miyazaki, J Clin Micro 33:3115, ‘95) 隐球菌细胞壁为alpha-葡聚糖,故为阴性 阳性结果只能代表存在侵袭性真菌感染,不能确定种类 *内毒素：NaOH预处理 *抗肿瘤药：香菇糖、裂殖菌多糖 *免疫治疗：白蛋白、球蛋白 *血液透析中使用硝酸纤维素制品 *术中使用棉制品、海绵等 *血红蛋白 细菌及真菌定植状态不影响G试验 Pickering J, et al. J Clin Microbiol 2005; 43: 5957–62 体液中存在葡聚糖酶使BDG降解。 Kawai R et al.2006，Appl Microbiol Biotechnol 71:898–906 成人急性髓内白血病，慢性淋巴细胞白血病，急性淋巴细胞白血病，骨髓发育不良综合症，非霍奇金淋巴瘤。 疑有内源性真菌内眼炎的患者 术后病重患者 中暑患者 农民肺 Imai K et al.2004，Nihon Kokyuki GakkaiZasshi 42:1024–1029 肺曲霉病患者 卡氏肺囊