红褐斑腿蝗免疫体系主要成分及其功能研究-动物学专业论文.docxVIP

中文摘要本文以红褐斑腿蝗Ch搬玎鲫粥p加g“妇(s协1)为研究对象，利用机械 中文摘要 本文以红褐斑腿蝗Ch搬玎鲫粥p加g“妇(s协1)为研究对象，利用机械 损伤、注射G75凝胶微珠、体外血细胞短期培养及显微观察等手段， 对红褐斑腿蝗的免疫体系进行了研究，并利用蛋白快速层析技术对其 中两种主要的体液免疫因子，酚氧化酶(PO)和凝集素进行了初步 的分离和性质鉴定。研究结果如下： 1．红褐斑腿蝗血淋巴中，血细胞主要有原血胞、浆血胞、脂血 胞、粒血胞、囊血胞、珠血胞和类绛色血胞七种类型。 2．在体外培养的红褐斑腿蝗血细胞培养液中加入G75微珠后 2～4h内，血细胞基本完成对G75颗粒的包囊作用。该过程首先由少 数粒血胞黏附于微珠表面，破裂释放内含颗粒物质后，诱集大量的其 他血胞(主要是浆血胞)来完成包囊。 3．机械损伤可以在一定程度上激活红褐斑腿蝗体内的PPo级联 反应，使得P0活力显著上升，与对照组相比差异(极)显著(PO．01 或P0．05)。注射G75微珠与对照相比，对红褐斑腿蝗体内的PPO 级联系统具有显著的激活作用(Po．01)。 4．经BPT处理后， P0活性显著上升；TIs和PTU虽然对Po 活性具有明显的抑制作用，但可被注射G75后proPP0强烈的累积效 应在一定程度上抵消。 5．沉淀红褐斑腿蝗体内P0的最适硫酸铵饱和度为30％～50％， 但活力损伤较大，回收率仅为9．84％，比活力由0．127U／mg蛋白上升 至O．153U／mg蛋白；HiPrep 26／10 DesaIting脱盐后，活力回收率有较 大幅度的上升，为61．35％，同时比活力也升至1．3952U／mg；最终经 大幅度的上升，为61．35％，同时比活力也升至1．3952U／mg；最终经 HiPr印16／100 sephadex刑G一75凝胶过滤后，活力回收率为1 1．21％， 但比活力则上升至3．6263 U／mg，最终纯化倍数为28．55倍。 SDs．PAGE电泳检测结果显示为2条蛋白带，分子量分别为64．2 kDa 和55．3kDa。 6．以注射G75微珠、昆虫生理盐水BIs及针刺作为红褐斑腿蝗 凝集素的诱导因子，结果发现，以注射G75微珠效果最佳，体内持 续时间最久。在进行糖半抗原专一性抑制研究中，发现两种D．构象 单糖(D．半乳糖和D一岩藻糖)对其血凝活力具有明显的抑制作用， 而葡萄糖、甘露糖、L．岩藻糖则没有抑制作用。 7．利用固定化鸡红血细胞对红褐斑腿蝗匀浆中凝集素进行吸附 后，以D一半乳糖(0．01 mol，L)进行解吸附，经HiPr印26／10 Desalting 脱去半乳糖后，可以去除多数杂蛋白，其血凝效价则由原先的 4．484ti舵／mg上升至129．427titre／mg，活力回收率为34．54％，纯化倍 数达到28．864；进一步使用DEAE阴离子交换洗脱后，活力最高的 组分血凝效价升至133_315titre／mg，活力回收率为32．44％；纯化倍数 达到29．73l倍。经10倍浓缩后，sDS—PAGE电泳检验结果，具有两 条分子量分别为61．4 kDa和55．5kDa。 关键词：红褐斑腿蝗，血细胞，包囊作用，酚氧化酶，凝集素，蛋自 层析 【II AbstractIn Abstract In this pater’we use C矗搬Hf9芦p加∥括(Stal)as research object．Its immune system was studied with i巧ected G75，nlechanical stimulus， hemocytes culture afld di饪-erential interference micrography et al memods The main componem ofhumoral immunitM the property ofP0 and lectin， was s印arated丘Dm homogenate of∞缸聆f叩s pf玎∥括wim AKlA FPLC The main results as follows 1．SeVen呻es of msect hemocytes have been identmed in me hemolymph of C臼缸，zf印四pf托影括，nanlelyProhemocytes，Plasmatocytes， (hanulocytes，Sphemlocytes，Adipocytes，Oenoc”oids and Cystoc”es 2．ARer addition Sephadex G75 into the hemocytes of culture in vitro，the encystment is completed w