酯酶与空氧化酶.pptVIP

√　（快） － 苯甲酰胆碱 √　（快） － 长链脂肪酸胆碱 － √ 乙酰-β-基甲基胆碱 √ 高浓度不抑制其活性 √（快） 高浓度时抑制其活性 乙酰胆碱 胆碱酯酶 乙酰胆碱酯酶 AChE 和 ChE　的底物特异性 （一）显示方法——亚铁氰化铜法 1、反应原理 　　利用乙酰胆碱酯酶能将乙酰胆碱盐水解产生硫代胆碱，使铁氰化物还原为亚铁氰化物，再与铜离子结合形成亚铁氰化铜显色沉淀，证明酶活性的存在。　　 乙酰胆碱盐 AChE 硫代胆碱 若用四异丙基焦磷酰胺抑制胆碱酯酶，可单独显示乙酰胆碱酯酶。 铁氰化钾 亚铁氰化钾+Cu2+ 亚铁氰化铜 ２、孵育液 　乙酰硫代胆碱碘盐 5mg 　0.1mol/L醋酸缓冲液pH5.5 6.5ml 　0.1mol/L (2.94%) 柠檬酸钠 0.5ml 　30mmol/L (0.75%) CuSO4 1.0ml 　5mmol/L (0.164%) 铁氰化钾 1.0ml 蒸馏水 1.0ml 　　乙酰胆碱碘盐完全溶解于醋酸缓冲液后，依次加入其它溶液，临用前不超过30分钟内配制，充分混匀，至溶液呈亮绿色，最终pH5.5。 ３、操作步骤 (1) 新鲜组织恒冷箱切片； (2)冷丙酮或10%福尔马林固定20-25min； (3)蒸馏水洗； (4)入孵育液37℃，１h； (5)蒸馏水洗； (6)甘油明胶封固。 ４、结果与评价 　　乙酰胆碱酯酶和胆