利用rnai技术对收拟南芥液泡h.docxVIP

摘 摘 要 植物液泡I-I+-ATPasc(V-ATPasc)是一类特殊的膜转运结合蛋白，能水解ATP产生 能量、调节PH值、产生跨膜质子电化学势梯度来驱动物质转运；同时，在植物处于 逆境时还能通过调节自身的活性使植物适应环境得以生存，作为胁迫响应酶受到越来 越多的关注。拟南芥V-ATPasc由13个亚基组成，其中c亚基对逆境的响应更为敏感。 本论文利用RNAi技术获得了拟南芥4个PH．4-c基因不同沉默程度的纯合体转基因植 物，并对其中的两个基因功能进行了初步分析，结果如下： 1．构建了拟南芥VHA-cl叫基因共7个RNAi表达载体，通过农杆菌介导法将其 分别导入野生型拟南芥，并成功获得了针对其中4个基因的纯合转基因拟南芥。 2．用半定量RT-PCR对3个基因的纯合转基因植物中目标基因的沉默水平进行了检 测，其中：VH,,I-cI得到了7株纯合转基因植株，有2株沉默程度较强：VHA．．c4 得到了10株纯合转基因植株，4株沉默程度较强：V]-IA-c5得到了18株纯合转基 因植株，有5株中等程度沉默个体。表明基因沉默载体的构建是有效的。 3．用半定量RT-PCR对目标基因的沉默特异性的检测发现：对VI-L4-cl的沉默是特异 的，而对VHA-c4的沉默同时引起了同源性较高的VHA-c2的沉默。 4．对VHA-cl沉默纯合体植株的表型分析发现：光照下，RNA干扰导致沉默纯合体 的