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天津医科大学 硕士学位论文 miR-20a对ES－2细胞的调节作用及其靶基因的确定 姓名：姜洁纯 申请学位级别：硕士 专业：基础医学；病原生物学 指导教师：汤华 200805 天津医科大学硕+学位论文中文摘要 天津医科大学硕+学位论文 中文摘要 【目的】 miRNA是近些年来新发现的一类能够通过与其靶位点结合调控靶基因表 达水平的小RNA分子家族，在生物体内发挥着重要作用。研究表明，一些miRNA 与人类肿瘤密切相关，直接或间接调控肿瘤的增殖和转移过程。本文旨在研究 miRNA在肿瘤增殖与转移中的调控作用及其可能的机制。 【方法】 l采用MTT法和平板克隆形成实验研究miRNA在肿瘤的增殖过程中的调 节作用。 2通过transwell侵袭实验研究miRNA在恶性肿瘤细胞转移过程的作用。 3利用表达谱芯片和生物信息学方法筛选候选miRNA靶基因，并进行荧光 报告载体的验证，并采用RT-PCR方法验证miRNA对其靶基因的作用。 【结果】 1 MTT法检测发现，miR．20a对ES．2细胞短期内的生长没有显著影响；平 板克隆形成实验表明miR．20a对ES．2细胞的增殖具有明显的促进作用。 2通过transwell侵袭实验结果分析，发现miR．20a对ES．2细胞的侵袭及转 移功能具有正向调节作用。 3利用表达谱芯片结合生物信息学的方法，筛选到miR．20a的两个候选靶 基因APP和CCNDl。利用荧光报告载体的方法验证了miR-20a与候选靶 基因的直接作用关系，并采用RT-PCR方法再次进行验证。 【结论】 本文以miR．20a为代表研究了miRNA在肿瘤的增殖及侵袭过程中的调控 作用，筛选并验证了miR．20a直接作用的靶基因APP和CCNDl。同时对miR-20a 在肿瘤增殖及侵袭过程中的调控功能和调控机制进行探索和研究，使我们对于 肿瘤的增殖和转移特性及调控机制有了进一步的理解，并为临床上恶性肿瘤的 防治提供了一条新的可能途径。 关键词：microRNAs；卵巢癌；肿瘤；miR-20a；基因芯片；APP；CCNDl 天津医科大学硕士学位论文Abstact 天津医科大学硕士学位论文 Abstact 【Purpose】 MicroRNAs(miRNA)have emceed relatively as a new class of small， non—coding RNAs that regulate gene expression and have been identified to be very important in many aspects．Recent studies show that they are very important regulatory molecules in regulating cancer proliferation and metastasis．To predict the regulating miRNA involved in human tumor and deeply study the biological functions which miRNA involved through regulating the expression of target genes． 【Exper i menta I Des i gn】 The possible interaction between miRNA and proliferation was investigated using MTT and colony forming assay．The impact of processes on invasion by the changes of miRNA was investigated using transwell invasion assay．The target genes were investigated using mRNA expression array combining、析th bioinformations．And the targets were further conformed by GFP sensor assay．The effect of mRNA being regulated by miRNA was investigated using mRNA expression array and RT-PCR． 【Resu Its】 Through colony forming assay,we found miR一20a Call improve the processes of cell prolife