HC core蛋白诱导巨噬细胞负调控分子A20高表达及机制研究.docx

河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则，承担相应的法律责任。 黜蝴小阳雠：袅钟二 涨《麓 2口，岁年午月z口日 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究 成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 研究生签名：蒙门、天 导师签章： ≯口少年4-月)护目 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 7 英文缩写 ．．14 研究论文HCV core蛋白诱导巨噬细胞负调控分子A20高表达及机制研 究 引言 ．．15 第一部分HCV core蛋白上调巨噬细胞负调控分子A20的表达及对细胞 因子分泌的影响 前言月U看 ．．17．．17 材料与方法 ．．17 结果 ．．31 附图 ．．33 附表．． 39 讨论 ．．41 小结 ．．42 参考文献 ．．42 第二部分HCV core蛋白与膜受体gClqR的结合介导了巨噬细胞负调控 分子A20的高表达 前言刚吾 ．．44．．44 材料与方法 ．．44 结果 ．．52 附图 ．．54 讨论 ．．57 小结 ．．57 参考文献 ．．58 第三部分参与HCV core蛋白诱导巨噬细胞负调控分子A20高表达的信 号分子 前言月lJ吾 ．．60．．60 材料与方法 ．．60 万方数据 结果 结果多口刁≮ ．．O，．．67 附图 ．．69 讨{仑 ．．84 小结 ．186 参考文献 ．．86 结论 ．．88 综述HCV感染与固有免疫应答 89 致谢 117 个人简历 1 1 8 万方数据 中文摘要HCV 中文摘要 HCV core蛋白诱导巨噬细胞负调控分子A20高表达 及机制研究 摘 要 目的：丙型肝炎病毒(HCV)感染己成为我国乃至全球面临的严重 公共健康问题。研究证实，50～85％HCV感染者将发展为慢性感染，继而 导致肝硬化和肝细胞癌的发生。HCV属单股正链RNA病毒，其基因组可 编码三种结构蛋白(core、E1、E2)及七种非结构蛋白(P7、NS2、NA3、 NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)。其中，HCV core蛋白(21kDa)是HCV 病毒感染及复制过程中第一个合成的结构蛋白，直接参与病毒本身生命周 期活动及病毒颗粒的组装。Core蛋白可以从感染的肝细胞中释放出来， 与多种免疫细胞相互作用，影响着宿主细胞的状态。有研究发现，HCV core蛋白通过与膜受体gClqR的结合介导多种细胞的生物学功能改变， 如：抑制T淋巴细胞IL．2和IL．2Ra的基因转录，降低T淋巴细胞增殖； 抑制B淋巴细胞SOCS．1的表达，促进B淋巴细胞增殖；诱导巨噬细胞 负调控分子Tim．3、PD．1和SOCS．1的高表达，抑制巨噬细胞IL-12的分 泌等。除此以外，HCV core蛋白可与巨噬细胞表面的TLR2受体结合诱 导巨噬细胞TLR的免疫耐受。HCV core蛋白还可抑制DC细胞MHC—I 类分子的表达，降低DC细胞的抗原提呈能力。总之，HCV core蛋白可 影响机体多种免疫细胞的功能状态。 肝脏，作为HCV感染的主要靶器官，除了肝细胞、肝间质细胞等主 要构成细胞外，还含有DC细胞、巨噬细胞、NK细胞、NKT、T淋巴、B 淋巴细胞等各类免疫细胞，同样，巨噬细胞、NK细胞等固有免疫细胞在 肝脏中也执行着第一线防御功能。肝脏内定居的巨噬细胞也称枯否氏细胞 (kuffer cells)，占肝中细胞总数的15--一20％，占机体单核．巨噬细胞总数 的8090％。在不同的组织微环境和外部因素刺激下，巨噬细胞可分化为 不同的亚型并执行不同的功能。我们的前期工作模拟肝脏微环境，将巨噬 细胞与HCV core蛋白以及肝细胞共同培养，结果显示，巨噬细胞转录因子 p-STAT3及膜分子CD206表达升高，提示，巨噬细胞有向M2型巨噬细胞分 化的倾向。而M2型巨噬细胞主要作用为抑制炎症反应，诱导免疫抑制状 万方数据 中文摘要态，无疑对HCV病毒的清除非常不利，易导致HCV感染的慢性化。也就 中文摘要 态，无疑对HCV病毒的清除非常不利，易导致HCV感染的慢性化。也就 是说，在HCV所致的感染过程中，肝脏的病理性微环境可影响巨噬细胞 的活化状态，同时不同活化状态的巨噬细胞又促进了HCV疾病的慢性化 进程