坦布苏病毒ns5蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及快速检测胶体金试纸条方法的建立-预防兽医学专业毕医业论文.docxVIP

关于学位论文原创-I+I禾D使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所 关于学位论文原创-I+I禾D使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所 取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个 人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同 意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子 版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印 或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名： 导 师签名： 日 期：2 1堇：笪；Z 万方数据 符号说明缩写 符号说明 缩写 英文名称 中文名称 bp base pair 碱基对 DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 RNA ribonucleic acid 核糖核酸 CDNA Complementary DNA 互补DNA PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链式反应 I玎 Reverse Transcription 反转录 ELISA Enzyme linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附试验 DAS． Double antibody sandwich ELISA 双抗体夹心ELISA ELISA FBS 胎牛血清 FITC fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 g Gram 克 h hour 小时 HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 IFA Indirect fluencescreen assay 间接荧光抗体试验 Kb Kilo-basepair 千碱基对 KD Kilo．dalton 千道尔顿 L Liter 升 mAb monoclonal antibody 单克隆抗体 mg milligram 毫克 mln minute 分钟 mL milliter 毫升 E Envelop protein 囊膜蛋白 0RF Open reading frame 开放阅读框架 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 r／min revolutions per minute 转|食钠 万方数据 S S second 秒 SDS．PAGE SDS-polyacrylamide gels 十二烷基磺酸钠．聚丙酰胺凝 electrophoresis 胶电泳法 U Unit 单位 肛L microliter 微升 ¨g microgram 微克’ TⅦⅣ Tembusu virus 坦布苏病毒 DPV Duck plague virus 鸭瘟病毒 AⅣ Avian influenza virus 禽流感病毒 删 Avian reovirus 禽呼肠孤病毒 M mole／liter 摩尔／升 mM millimole／liter 毫摩尔／升 Loop-mediated isothermal LAMP 环介导等温扩增 amplification 万方数据 目 目 录 中文摘要 ．I Abstract ． ．．．．． ． ．． ．．． II 1弓』言 ． ． ．： ．． ．．： j ．；．． ． ．． ．．．1 1．1病原学 ． ．．1 1．1．1黄病毒 ： ．： 1 1．1．2新型黄病毒——_DTMUV 2 1．1．3形态学 2 1．1．4理化特性 2 1．1．5体外培养特性 3 1．2流行病学 。3 1．3临床症状 ．．3 1．4病理变化 一4 1．5分子生物学 。4 1．5．1黄病毒结构蛋白功能 5 1．5．2非结构蛋白功能 6 1．6坦布苏病毒的诊断方法研究 ．．8 1．7坦布苏病毒的防制 12 1．8单克隆抗体研究进展 12 1．9免疫胶体金技术研究进展 14 1．10本研究的目的及意义 ．．18 2材料与方法 20 2．1材料 20 2．1．1载体，病毒，细胞及试验动物 ．20 2．1．2主要试剂 ．20 2．1．3主要试剂的配制 ．20 2．1．4主要设备及仪器 ．24 2．2 DTMUV NS5蛋白单克隆抗体的制备 24 2．2．1 DTMIⅣNS5蛋白的制备及纯化 ．24 2．2．3间接ELISA方法的建立 27 万方数据 2．2．4杂交瘤细胞株的建立 2．2．4杂交瘤细胞株的建立 ．27 2．2．5腹水诱导制备 ．： 32 2．2．6单克隆抗体的制备