叶子花重瓣品种DOD基因序列比对分析.docVIP

叶子花重瓣品种DOD 序列比对分析   呻子花品种的苞片色彩丰富艳丽，是研究颜 色表达调控的优良材料。对调控甜菜色素合成酶的DOD基因 进行比对分析，以探讨叶子花的DOD基因与其苞片颜色表迗 的关联。通过对5个具有不同苞片颜色的重瓣叶子花栽培品 种DOD基因转录组测序，应用软件ClustalX 2.0进行DOD cDNA序列比对分析，结果显示其序列同源性达100%，其调 控色素合成的功能基因序列并没有差异。叶子花重瓣栽培品 种的不同苞片颜色的表达与DOD基因对色素合成的调控可能 无直接关联。 关键词：叶子花；重瓣栽培品种；甜菜色素；DOPA 4, 5双加氧酶；DOD cDNA；基因比对 S 685 A(2014) 修回日期基金项目：深圳市科技创新委员会基础研究项目(JCYJ 20120615172425764 )和深圳市城市管理局科研项目 (200901)资助 苏进展(1958)，男，香港居民，厦门日懋 城建园林建设股份有限公司董事长，深圳市日令园林绿化有 限公司总经理。 Email： taochen. mobg@gmail. com 陈涛为通讯 。 叶子花属(Bougainvillea )植物是紫茉莉科 (Nyctaginaceae)多年生灌木或乔木，有10余种，原产南 美洲。栽培品种丰富，苞片颜色极其艳丽多样，有单瓣与重 瓣之分，是热带亚热带地区的重要观赏植物，也是研究花色 变异和表迗的优良材料［1］。重瓣叶子花早在20世纪60年 代就陆续在菲律宾培育出来，苞片有红色、粉红色和橙色等 ［2，3］，后在印度进一步培育出花叶重瓣品种［4］。 与其他紫茉莉科和大多数石竹目(Caryophyllales)植 物一样，叶子花的苞片色素主要是甜菜色素(Betalain)。 甜菜色素是一类植物次生代谢产生的生物碱，主要包括甜菜 红素和甜菜黄素［5］。形成甜菜色素的代谢途径主要由 D0PA4, 5双加氧酶(DOD)催化调控［6］。研究发现，编码与 叶子花同科的紫茉莉(Mirabilis jalapa)的DOD cDNA序 列(MjDOD, AB435372. 1)，与甜菜(Beta vulgaris： BvDOD， AJ583017)有67%的相似度，与大花马齿苋(Phytolaca grandiflora PgDOD, AJ580598)的相似度为 63%［7，8］。 光口十子花(Bougainvillea glabra BgDOD, AB435373. 1) 苞片的D0PA4，5双加氧酶cDNA全长1 078 bp，具有一个 870 bp的开放阅读框(ORF)，编码268个氨基酸［8］。研究 根据光叶子花DOD cDNA序列和蛋白质序列(BAG80687. 1) 设计了一对叶子花DOD基因的特异性开放阅读框引物 BdodF/R,以具有不同苞片颜色的5个重瓣叶子花品种为材 料，通过反转录克隆其D0D基因的开放阅读框序列，经序列 比对来探讨D0D基因与叶子花苞片不同颜色表迗之间的相关 性。 1材料和方法 1.1材料 研究材料选择苞片都是重瓣但颜色各不同或具花叶的5 个重瓣叶子花栽培品种（表1）。各品种的花苞片均采自广东 省深圳市仙湖植物园叶子花保育与研发基地，用液氣取样 定保存，供RNA提取。 1. 2总RNA提取与cDNA合成 采用新拓扑生物科技有限公司的新型植物总RNA提取试 剂盒提取5个不同重瓣叶子花品种苞片 表1供试RNA提取的样品材料 Table 1 Material for RNA extraction 3讨论 叶子花的苞片色彩多样，但迄今尚未见有真蓝色。不同 色彩苞片的叶子花品种的色素生物合成调控基因序列的比 对及其与苞片颜色差异表达的规律分析，对于新花色品种的 分子育种具有重要价值。甜菜碱是紫茉莉科、苋科、藜科等 大多数石竹目植物花果等器官颜色的主要色素。甜菜色素在 植物不同器官中的含量和分布规律与颜色的表达密切相关。 D0PA4, 5双加氧酶(DOD)是甜菜色素生物合成过程中的关 键酶，对研究花色表达调控至关重要[11]。从花色不同的大 花马齿苋、甜菜、紫茉莉和光叶子花中克隆的DOD基因，其 序列均有不同程度的差异。试验中的5个重瓣叶子花品种具 有共同的来源，都是来自巴特叶子花 (BougainvilleaXbuttiana)的栽培品种。虽然这几个品 种各具有不同颜色的苞片，但调控其色素合成的DOD基因 cDNA序列却完全相同，表明不同苞片颜色的表迗与DOD基 对色素合成的调控可能并非直接相关。甜菜色素是甜菜醛氨 酸与不同氨基酸结合的衍生物，在植物体中表现为红色、紫 色和黄色等多种颜色，主要包括甜菜红素和甜菜黄素两种形 式，且可随pH