常规的普通实验室检测在肉鸡养殖中的应用.ppt

常规的普通实验室检测在肉鸡养殖中的应用 田 野 细菌的革兰氏染色 常用抗菌药物敏感性试验 金标层析法检测技术 水的细菌学检查 一、革兰氏染色 1.革兰氏染色机理 当用结晶紫初染后，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。。 2.革兰氏染色法的基本方法 先用初染剂结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌。 3.革兰氏染色的步骤 1）、涂片：用1%盐酸清洁玻片后，在玻片中央滴上一小滴蒸馏水，再用无菌操作的方法挑菌少许于玻片的水中，并充分混匀涂成薄膜。 2）、干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。 3）、固定：涂面朝上，通过微火2-3次。 4）、染色： 结晶紫染色1分钟--水洗--碘液媒染1-2分钟--水洗--酒精脱色15-20秒--水洗--番红复染色2-3分钟--水洗--干燥--镜检记录。 染色结果 染色结果 染色结果 二、常用抗菌药物敏感性试验 抗菌药物敏感性试验（AST，简称药敏试验）：用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。 （1）最低抑制浓度 （minimal inhibitory concentration ，MIC ） ：体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度，临床医师可以根据MIC确定药物剂量。通常达到稳态的血药峰浓度（Css）max应为MIC的4-8倍，重症感染以大于8倍为妥。 （2）为方便临床给药，根据MIC提供一个定性的结果是必要的。临床兽医师根据敏感、中介、耐药的提示结合MIC可以方便地制定用药方案。 敏感（S）：表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌 药物血液浓度或组织浓度4-8倍，可以用常规剂量治愈。 中介（I）：表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。 耐药（R）：表示该药物对细菌的MIC值等于或高于常规剂量下药物的血液浓度或组织浓度，细菌不能被该种药物抑制。 常用的药敏测定方法 纸片扩散法（Kirby-Bauer test） 稀释法（dilution test） E试验法（E test） 联合药物敏感试验 1、培养基 操作步骤： 1、玻璃器皿的准备 冲洗、包裹、灭菌、干燥 2、记量、称取原料 3、加热溶解 4、校正PH值 5、灭菌 6、分装、包裹、备用 2、药敏片 1、单药（一种成分） 市场生化试剂店有售，也可自制。但含量及监测标准有严格界定。建议购买 2、成药（复方成分） 多种联合的抗菌药物制剂应以其成分中某种含量最高的抗菌药物为标准稀释成有效浓度。但多数厂家由于产品配方机密，多按产品用量进行配制。药敏片可由厂家提供，也可自制。 3、中药草药 将中药研成粉未，1克加适量的水充分浸泡煮沸,滤液除去杂质后浓缩成1毫升,过滤、高压灭菌后加入100张纸片干燥备用。 制作步骤： 1、纸片的准备 2、药液的配制 3、抗菌药敏纸片制作 简易药敏片的制法 纸片的准备： 1、取新华3号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2、药片吸水量的测定 在上述药片用微量移液器进行滴加蒸馏水，最可使药片完全浸透又不滴水为宜，最终计算出每片药片的吸水量。一般常用直经6mm的定性滤纸药片吸水量为0.02ml。 药液的制备（用于商品药的试验）： 按兽药说明书(或标签)上标明的治疗量的10-20倍比例配制药液。如某药品：100g兑水100kg，表明该药治疗量为1g兑水1L，配制药液时就是1g加50-100ml水或1L水加10-20g药品，即为配制药敏片所用的药液浓度。 抗菌药的稀释剂通常用纯化水。 说明：