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凯氏定氮法检测N含量 凯氏定氮原理： 测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有 机氮都转变成无机铵盐 （消化炉SBS800），然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏 出并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定，就可计算出样品中的氮量 （凯氏定氮仪D4000）。 由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。 蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨 与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴 定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。整个过程可以使用德国OMNILAB凯氏 定氮系统进行检测。 反应化学方程式： 1. CuSO4 H2SO4 NH4 2SO4 有机物中的胺根在强热和 ，浓 作用下，硝化生成 （ ） 反应 2NH2+H2S04+2H (NH4)2S04 CuSO4 式为： ＝ （其中 做催化剂） 2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3溶液中反应式 :(NH4)2SO4+2NaOH 2NH3+2H2O+Na2SO4 为 ＝ 2NH3+4H3BO3 (NH4)2B4O7+5H2O ＝ 3. H2SO4 HCI HCI 用已知浓度的 （或 ）标准溶液滴定，根据 消耗的量计算出氮的含量，然 后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量 (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O (NH4)2SO4+4H3BO3 反应式为： ＝ (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O 2NH4Cl+4H3BO3 ＝ 凯氏定氮仪操作说明书 FoodALYTD4000 、 NaOH H3BO3 1 开机前准备：蒸馏水容器、 溶液容器、 溶液容器。自来水管或冷却水循环水 器。32%氢氧化钠溶液，2%-4%的硼酸溶液。 、 NaOH H3BO3 2 开机前连接好 进样管、 进样管、稀释水进水管、蒸汽水进水管、废液出水管、 冷却水进水管和冷却水出水管。 、 3 开机前确认各进样管已连接好。 、 4 开机前，打开自来水水管头或冷却水循环水器。打开凯氏定氮仪电源开关，仪器开始运行。 显示屏会显示steamgeneratorheating （蒸汽发生器加热中，同时显示屏下方会出现沙漏 计时器），蒸汽发生器加热完毕后进入开始界面，显示如下： 5、程序编辑：旋转操作界面的旋钮，将黑色条带旋转至PROGRAM，按下旋钮进入程序旋 2 转界面，通过旋转旋钮旋转不同的程序。例：选择程序 ，出现下图 “==”继续 “ ==”返回 旋转旋钮至==按下旋钮，进入程序编辑。如下图 DIL,H2O是稀释水添加量，NaOH是氢氧化钠溶液添加量，DIST,TIME是蒸馏时间。溶液添 S 16ml/s 10ml/s 加量以及蒸馏时间都是以 为单位。稀释水加入速度是 ，氢氧化钠加入速度是 ， 蒸馏时间一般选择在300-360s。稀释水和氢氧化钠的加入量根据蒸馏